金標類(lèi)檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則（食藥監辦械函[2013]3號）

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金標類(lèi)檢測試劑注冊技術(shù)審查指導原則
（食藥監辦械函[2013]3號）

一、前言

本指導原則主要針對金標類(lèi)檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節提出指導性技術(shù)要求。

本指導原則系對金標類(lèi)檢測試劑的一般要求，申請人應依據產(chǎn)品特性確定其中的具體內容是否適用，若不適用，需詳細闡述其理由及相應的科學(xué)依據。

本指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著(zhù)法規和標準的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內容也將進(jìn)行適時(shí)的調整。

二、適用范圍

本指導原則適用于第三類(lèi)體外診斷試劑中金標類(lèi)試劑的注冊技術(shù)審查，其他類(lèi)金標試劑可作參考。

三、基本要求

（一）基本原則

1.診斷試劑的研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應當制定相應的質(zhì)量指標，并應符合有關(guān)法規的要求。

2.診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應具備相應的專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員、儀器設備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫療器械生產(chǎn)許可證》；同時(shí)，生產(chǎn)企業(yè)應按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實(shí)施細則（試行）》的要求建立相應的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實(shí)施并保持有效運行；生產(chǎn)企業(yè)還應該通過(guò)《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。

3.診斷試劑的研制應當按照科學(xué)、規范的原則組織研發(fā)，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學(xué)原理。

4.研制生產(chǎn)過(guò)程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。

5.生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩定、工藝可控、檢測有效。

（二）原材料質(zhì)量控制

1.主要生物原料

與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)生物原科。這類(lèi)原料可用于膠體金標記、包被硝酸纖維膜及用于制備質(zhì)控線(xiàn)的抗原或抗體等。使用前應按照工藝要求對這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達到規定的質(zhì)量標準。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩定；若購買(mǎi)，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據國家相關(guān)法規的要求進(jìn)行變更申請。

主要生物原料的常規檢驗項目一般包括：

（1）外觀(guān)

肉眼觀(guān)察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應具備相應外觀(guān)標準。

（2）純度和分子量

主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜的聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳。一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質(zhì)量標準，分子量大小應在正確的條帶位置。

（3）蛋白濃度

蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進(jìn)行檢測。

（4）效價(jià)

效價(jià)的測定一般根據蛋白含量測定結果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應達到規定的要求。

（5）功能性實(shí)驗

功能性實(shí)驗是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。用于制備質(zhì)控線(xiàn)的抗原或抗體可采用其他適宜方法進(jìn)行功能性實(shí)驗。

2.生物輔料

生物輔料一般指在生產(chǎn)過(guò)程中作為蛋白保護劑用途的一類(lèi)生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標準應符合《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）》規定的質(zhì)量標準要求并檢驗合格，達到相應的質(zhì)量標準后方可用于生產(chǎn)。

建議對牛血清白蛋白作以下檢驗：

外觀(guān)：應為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無(wú)吸潮，無(wú)結塊，無(wú)肉眼可見(jiàn)的其他雜質(zhì)顆粒。

溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時(shí)間在18~26℃時(shí)應不大于15分鐘，pH值應為6.5~7.1。

總蛋白含量：用雙縮脲方法來(lái)測定，其標準為大于等于95%。

總蛋白中的牛血清白蛋白（BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為≥95%。

BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量，其標準為≥90%。

生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。

3.化學(xué)原材料

化學(xué)原材料的質(zhì)量標準參照《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）》分析純級別進(jìn)行檢驗。主要的檢測指標包括：外觀(guān)、一般鹽類(lèi)檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。

主要化學(xué)原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標準應達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。

4.其他物料

硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙、玻璃纖維膜等在購入時(shí)，其生產(chǎn)商必須提供該批次材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標準應達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。

（1）硝酸纖維素膜

硝酸纖維素膜應具有厚度、孔徑大小等要求，毛細遷移速度，韌性（切割時(shí)膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細遷移速度偏差范圍）應達到規定的要求。

（2）玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙

玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應具有厚度、毛細遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應達到規定的要求。

（3）玻璃纖維膜

適用于全血檢測的金標試劑，過(guò)濾紅細胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，應具有厚度、孔徑大小等要求。

（4）塑料襯片

塑料襯片應具有厚度、硬度（切割時(shí)一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標識吻合）、粘性（切割時(shí)造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。

（5）其他

粘膠紙、鋁箔袋、說(shuō)明書(shū)、包裝外盒、瓶子和干燥劑等，應參照國家食品藥品監督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》和《醫療器械說(shuō)明書(shū)、標簽和包裝標識管理規定》建立相應質(zhì)量控制標準。

（三）試劑盒的制備

本類(lèi)試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標記抗原或抗體的制備，膠體金標記的包被，檢測線(xiàn)及質(zhì)控線(xiàn)的制備，膠體金標記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過(guò)產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個(gè)質(zhì)控過(guò)程來(lái)保證其質(zhì)量符合規定。

1.膠體金標記物的制備

采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應符合規定，膠體金標記物在510~560nm波長(cháng)處應有最大吸收值，置2~8℃保存，應在規定的保存期內使用。采用合適的方法確定膠體金標記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。

2.檢測線(xiàn)及質(zhì)控線(xiàn)的制備

取已確定使用濃度的相關(guān)抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線(xiàn)，應用同樣方法制備質(zhì)控線(xiàn)，根據生產(chǎn)工藝在規定的溫度、濕度條件下干燥，置規定的濕度（通過(guò)驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線(xiàn)與質(zhì)控線(xiàn)應具有間隔距離要求，應對所用的金標用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進(jìn)行質(zhì)量檢測，如尺寸、外觀(guān)、包裝及吸附性能等，并記錄批號、數目、標識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。

3.貼膜、切割、裝袋

貼膜、切割及裝袋應在具有相應濕度（通過(guò)驗證方法確定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應有寬度要求。

（四）質(zhì)量控制

用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、精密度等指標，如具有國家標準品（參考品）的產(chǎn)品應使用國家標準品（參考品）或經(jīng)國家標準品（參考品）標化的企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗。若某類(lèi)試劑沒(méi)有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監督管理局已經(jīng)批準的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。

1.半成品質(zhì)量控制

（1）半成品抽樣

檢驗人員按批號抽取規定數量的半成品，作號標記，待檢。

（2）半成品檢驗

對所抽樣的半成品做陰/陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質(zhì)量標準。

企業(yè)應該對每一批試劑的半成品進(jìn)行穩定性研究，并制定相應的質(zhì)量標準。穩定性試驗可在在特定溫度或特定條件下完成。

2.成品質(zhì)量控制

每一批金標類(lèi)檢測試劑的試生產(chǎn)量應滿(mǎn)足工藝研究、分析性能驗證、穩定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。

一般使用國家標準品（參考品）對成品進(jìn)行檢驗，并達到相應質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒(méi)有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監督管理局已經(jīng)批準的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。

（1）物理檢查

應進(jìn)行外觀(guān)是否平整，材料附著(zhù)是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應符合質(zhì)量標準。

（2）性能方面的檢測

陰/陽(yáng)性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質(zhì)量標準。

每批試劑批放行前，應完成穩定性試驗，并達到相應的質(zhì)量標準。穩定性試驗可在特定溫度或特定條件下完成。

四、名詞解釋

金標類(lèi)檢測試劑：利用膠體金免疫技術(shù)，采用膠體金標記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關(guān)抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應用層析法的原理檢測樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。

五、參考文獻：

1.《中國生物制品規程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社