布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑注冊審查指導原則（2024年第1號）

附件：布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑注冊審查指導原則（2024年第1號）.doc

布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑
注冊審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評部門(mén)審評注冊申報資料提供依據。

本指導原則是對布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報的一般要求，申請人應依據產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學(xué)依據，并依據產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進(jìn)行充實(shí)和細化。

本指導原則是對申請人和審評人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規強制執行，如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應在遵循相關(guān)法規的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現行法規、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著(zhù)法規、標準的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導原則相關(guān)內容也將適時(shí)進(jìn)行調整。

一、適用范圍

本指導原則適用于布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑。是指基于抗原抗體反應原理，采用免疫層析法、酶聯(lián)免疫法或化學(xué)發(fā)光法等檢測技術(shù)，對來(lái)源于血清、血漿或全血等人體樣本中的布魯氏菌IgM/IgG抗體進(jìn)行體外定性檢測的試劑。預期用途為布魯氏菌感染的輔助診斷。布魯氏菌的生物學(xué)特征，相關(guān)疾病的臨床適應證背景以及相關(guān)的實(shí)驗室檢查方法等背景信息見(jiàn)附件。

本指導原則適用于布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申請和變更申請的情形。本指導原則僅針對布魯氏菌 IgM/IgG抗體檢測試劑注冊申報資料中的部分內容進(jìn)行撰寫(xiě)，其他未盡事宜應當符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家藥品監督管理局公告2021年第122號）等相關(guān)法規要求。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）監管信息

1. 產(chǎn)品名稱(chēng)及分類(lèi)編碼

產(chǎn)品名稱(chēng)應符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規的要求。根據《體外診斷試劑分類(lèi)規則》，該產(chǎn)品按照第三類(lèi)體外診斷試劑管理，分類(lèi)編碼為6840。

2. 其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報前與監管機構的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預期用途、申報產(chǎn)品上市歷史及其他需說(shuō)明的內容。建議申請人對以下幾方面內容進(jìn)行著(zhù)重介紹：

1.臨床適應證背景情況

描述布魯氏菌的生物學(xué)特征、流行病學(xué)特征、抗體的分布情況（濃度水平、產(chǎn)生和消失的時(shí)間等）、易感人群、感染后的臨床表現和相關(guān)疾病、現有的臨床診斷方法或其他實(shí)驗室檢查方法等。

2.同類(lèi)產(chǎn)品上市情況

從技術(shù)方法及預期用途等方面寫(xiě)明申報產(chǎn)品與現行臨床診斷方法以及目前市場(chǎng)上已獲批準的同類(lèi)產(chǎn)品之間的主要異同點(diǎn)。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗報告

1.1產(chǎn)品技術(shù)要求

注冊申請人應當在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩定的前提下，根據產(chǎn)品研制、前期評價(jià)等結果，依據國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻資料，結合產(chǎn)品特性按照《醫療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導原則》的要求編寫(xiě)。該類(lèi)產(chǎn)品作為第三類(lèi)體外診斷試劑，應當以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

如有適用的國家標準、行業(yè)標準，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應不低于相應的要求。

1.2產(chǎn)品檢驗報告

布魯氏菌IgM/IgG抗體檢測試劑尚無(wú)國家標準品，技術(shù)要求中應體現企業(yè)參考品的相關(guān)要求，并使用企業(yè)參考品對三批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗。

2. 分析性能研究

注冊申請人應采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，提交具體研究方法、試驗方案、試驗數據、統計分析等詳細資料。

如申報產(chǎn)品適用不同的機型，需要提交采用不同機型進(jìn)行性能評估的資料。如申報產(chǎn)品包含不同的包裝規格，需要對各包裝規格進(jìn)行分析或驗證。

適用的不同樣本類(lèi)型應分別進(jìn)行分析性能研究。

分析性能評估所用樣本的基本信息均需明確，例如樣本來(lái)源、樣本類(lèi)型、采集保存運輸和處理方式、稀釋方式、定值過(guò)程及數據等。研究中采用的布魯氏菌IgM/IgG抗體陽(yáng)性樣本，應采用科學(xué)合理的方法確定其陰陽(yáng)性和濃度水平，提交具體的試驗資料。分析性能評估用樣本一般應為真實(shí)樣本，如涉及稀釋后檢測，應采用與適用樣本類(lèi)型一致的陰性基質(zhì)。對于各項性能中采用的樣本，在下述各項性能研究資料中分別提供樣本信息列表。

2.1樣本穩定性

樣本穩定性研究應采用臨床真實(shí)樣本進(jìn)行，通常應當至少包含一定數量陰性樣本及弱陽(yáng)性樣本，考察樣本在經(jīng)歷不同的儲存條件后，試劑能否穩定輸出符合要求的結果。樣本穩定性可以包含樣本凍融穩定性和運輸穩定性的研究。

2.2適用的樣本類(lèi)型

描述適用的樣本類(lèi)型，如：血清、血漿或全血等，血漿和全血需考察不同抗凝劑的適用性。

如產(chǎn)品適用于血清和血漿，可采用同源比對驗證樣本的可比性。

如產(chǎn)品適用于全血，可采用該樣本類(lèi)型進(jìn)行全性能評估，亦可至少進(jìn)行檢出限、不同區域樣本的包容性和精密度研究。

2.3校準品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

描述校準品的量值溯源（如適用）。

描述質(zhì)控品的賦值（如適用）。需至少采用三批產(chǎn)品分別在不同適用機型進(jìn)行賦值研究。

2.4精密度

應對精密度指標，如標準差或變異系數等的評價(jià)標準做出合理要求。精密度研究應采用臨床樣本。

應考慮運行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設計合理的精密度試驗方案進(jìn)行評價(jià)。

設定合理的精密度評價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測，具體方案可參考性能評價(jià)相關(guān)文件進(jìn)行。

用于精密度評價(jià)的臨床樣本應至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、臨界陽(yáng)性樣本、（中或強）陽(yáng)性樣本，并根據產(chǎn)品特性設定適當的精密度要求。

陰性樣本：待測物濃度低于檢出限或為零濃度，陰性檢出率應為100%（n≥20）。

臨界陽(yáng)性樣本：待測物濃度略高于試劑盒的檢出限，陽(yáng)性檢出率應≥95%（n≥20）。

中陽(yáng)性樣本：待測物濃度呈中等陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。

強陽(yáng)性樣本：待測物濃度呈強陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%且CV≤15%（n≥20）。

2.5包容性

提供具有時(shí)間和區域特征性的不同來(lái)源的患者真實(shí)臨床樣本進(jìn)行驗證，應包括羊種、牛種、豬種布魯氏菌感染的情況。IgM抗體、IgG抗體檢測試劑分別研究，驗證內容應包括檢出限、重復性等，提供樣本及濃度的確認方法、試驗數據。其中應注意，包容性研究樣本和檢出限研究樣本不能重復。

2.6檢出限

檢出限的確定：建議選取特定滴度的特異性抗體陽(yáng)性樣本梯度稀釋進(jìn)行檢出限確定，每個(gè)梯度的稀釋液重復3～5份，每份稀釋液重復檢測不少于20次，將具有95%陽(yáng)性檢出率的抗體水平作為檢出限。

IgM抗體、IgG抗體檢測試劑應分別選擇不同來(lái)源具有代表性的3個(gè)臨床樣本進(jìn)行檢出限的確定。

檢出限的驗證：選擇具有時(shí)間和區域特征性的至少3個(gè)臨床樣本（與檢出限確定不同樣本）在檢出限濃度水平進(jìn)行驗證，應達到95%陽(yáng)性檢出率。

采用的稀釋液應與適用樣本類(lèi)型的基質(zhì)一致，可采用陰性樣本進(jìn)行稀釋?？贵w檢測試劑應提供詳細的抗體類(lèi)型和滴度的確認方法及驗證結果。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應驗證（IgM抗體、IgG抗體檢測試劑應分別驗證）

用于交叉反應驗證的病原體種類(lèi)主要考慮以下幾方面：抗原結構具有同源性（如在分類(lèi)學(xué)上的近緣菌）、易引起相同或相似的臨床癥狀（如胞內感染菌）、易并發(fā)感染的其他微生物（見(jiàn)表1），以及低濃度病原體特異性IgG抗體與高濃度特異性IgM抗體以及高濃度病原體特異性IgG抗體與低濃度特異性IgM抗體的交叉反應驗證。

提供所有用于交叉反應驗證的病原體抗體陽(yáng)性樣本的來(lái)源、和濃度/滴度確認等詳細的試驗資料。

驗證不少于30份在布魯氏菌病高發(fā)地區的正常健康人樣本。

2.7.2內源/外源物質(zhì)干擾

不同樣本類(lèi)型其潛在干擾物質(zhì)可能不同，應根據具體采集的樣本類(lèi)型，選擇適用的干擾物質(zhì)進(jìn)行研究（見(jiàn)表2）。建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評價(jià)，在抗體臨界陽(yáng)性水平進(jìn)行干擾試驗驗證。

2.8 高劑量鉤狀效應

申請人應評估高劑量鉤狀效應并提交研究資料。

2.9 IgM抗體破壞試驗（IgM抗體檢測試劑適用）

對至少5份含有病原體特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞試驗研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測，IgM檢測結果應為陰性。

2.10企業(yè)參考品性能

根據主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設置情況，采用三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗并提供詳細的試驗數據。

2.11反應體系研究

2.11.1研究樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇：是否受病程、臨床癥狀等因素的影響。

2.11.2反應條件確定

申請人應考慮反應時(shí)間、判讀時(shí)間、反應溫度/濕度、洗滌液體積和洗滌次數（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗確定上述條件的最佳組合。

2.11.3反應體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過(guò)試驗確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。對于IgM抗體檢測試劑，如采用間接法，建議考慮高濃度特異性IgG對結果的影響，合理設置IgG去除相關(guān)樣本處理步驟，以降低特異性IgG可能造成的假陰性和假陽(yáng)性。

3.穩定性研究

一般應包含研究方案，采用的樣本、儀器和試劑信息，數據（如檢驗結果、溫度記錄等）及試驗結果等。

3.1實(shí)時(shí)穩定性（貨架有效期）

提交至少三批申報產(chǎn)品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩定性研究資料。明確儲存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

3.2使用穩定性

提交申報產(chǎn)品實(shí)際使用期間穩定性的研究資料，應包括所有組成成分的開(kāi)封穩定性。適用時(shí)提交復溶穩定性、機載穩定性及凍融次數研究資料等。如涉及校準品，還應提交校準頻率或校準穩定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

3.3運輸穩定性

提交申報產(chǎn)品可在特定或者預期的條件下運輸的研究資料，應說(shuō)明產(chǎn)品正確運輸的環(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機械保護等）。同時(shí)說(shuō)明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運輸條件。注意應考察經(jīng)過(guò)運輸條件后實(shí)時(shí)穩定性。

4.陽(yáng)性判斷值研究

提交對申報試劑陰性/灰區/陽(yáng)性等結果判斷的陽(yáng)性判斷值（cut-off，CO）確定的研究資料，包括具體的試驗方案、人群樣本選擇、評價(jià)標準、統計學(xué)分析和研究數據等。確定陽(yáng)性判斷值使用的樣本來(lái)源的選擇應考慮如下因素的影響：

4.1不同地理區域流行病學(xué)背景的差異：高危人群（包括牧區和相關(guān)職業(yè)）和普通人群。

4.2患者處于不同的感染階段：急性期、亞急性期和慢性期，首次感染與復發(fā)感染。

申請人應根據具體情況選擇適當的方法，如受試者工作特征曲線(xiàn)（ROC）的分析方式，來(lái)確定合理的陽(yáng)性判斷值。若試驗結果存在灰區，則應明確灰區建立的基礎。應重點(diǎn)考察對弱陽(yáng)性樣本的區分能力，研究中應包含有統計學(xué)意義的弱陽(yáng)性樣本例數。

提交陽(yáng)性判斷值所用樣本信息列表，至少包括性別、年齡、動(dòng)物或其制品接觸史（如適用）、發(fā)病天數（如適用）、臨床診斷信息、樣本來(lái)源機構、抗體檢測結果等。陽(yáng)性判斷值研究用樣本不應與臨床試驗樣本重復。

如果產(chǎn)品適用不同樣本類(lèi)型，需要對所有樣本類(lèi)型進(jìn)行陽(yáng)性判斷值的驗證。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

5.1.1布魯氏菌抗體檢測試劑所用特異性抗原

病原體特異的抗原是該類(lèi)產(chǎn)品的關(guān)鍵原材料。在選擇抗原原料時(shí)，應注重抗原表位的選擇，避免菌種間差異造成的假陰性，亦應考慮抗原在其他近緣菌的表達情況，避免存在交叉反應出現假陽(yáng)性。原材料研究資料中應詳述該方面的考慮。

首先應詳述抗原表位及選擇依據，此外應提交抗原來(lái)源、制備、篩選、純化、鑒定及質(zhì)量標準（外觀(guān)、蛋白濃度、純度、分子量、功能性試驗等）詳細試驗資料。

主要包括以下兩種情況：

5.1.1.1企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應對毒株選擇、培養、抗原提取、純化、鑒定等試驗過(guò)程予以詳述。如為重組抗原，則應提交有關(guān)特定基因選擇、序列信息、克隆構建及轉化、抗原表達及純化、鑒定等詳細資料，重組抗原應明確與天然抗原結構的異同。

5.1.1. 2企業(yè)外購抗原

應詳述抗原的名稱(chēng)、抗原生物學(xué)來(lái)源、供應商名稱(chēng)、提交供應商選擇的研究資料及供應商出具的抗原性能指標及檢驗報告。重組抗原應描述關(guān)特定基因選擇、序列信息，克隆構建及轉化，抗原表達及純化、鑒定等資料，重組抗原應明確與天然抗原結構的異同。

5.1.2其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如小鼠抗人IgM/IgG單克隆抗體、酶標抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣本稀釋液等，均應進(jìn)行選擇及驗證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應商和質(zhì)量控制標準。免疫層析方法學(xué)的產(chǎn)品如適用于全血，應介紹血細胞去除方式，并驗證去除效果。

5.1.3試劑盒質(zhì)控品/質(zhì)控線(xiàn)

產(chǎn)品應設置合理的質(zhì)控品/質(zhì)控線(xiàn)。質(zhì)控品應至少包含陰性和陽(yáng)性?xún)蓚€(gè)水平?？贵w檢測試劑陽(yáng)性質(zhì)控品可選擇臨床陽(yáng)性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或陰性基質(zhì)等。提交相關(guān)原料的來(lái)源、選擇和性能確認等相關(guān)研究資料，明確供應商和質(zhì)量控制標準。企業(yè)應對質(zhì)控品的檢測結果（如A值）做出明確的范圍要求（試驗有效性的判斷）。

5.1.4企業(yè)參考品

該類(lèi)產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括陽(yáng)性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和重復性參考品。應根據產(chǎn)品性能驗證的實(shí)際需要設置企業(yè)參考品。

應提交企業(yè)參考品的原料來(lái)源、選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認方法或試劑等相關(guān)驗證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應與待測樣本相同。布魯氏菌抗體檢測試劑的企業(yè)參考品的設置建議如下：

5.1.4.1陽(yáng)性參考品

陽(yáng)性參考品應考慮覆蓋不同來(lái)源及特征的布魯氏菌抗體陽(yáng)性樣本，可選擇至少各5份確認為陽(yáng)性的臨床樣本，并設置不同滴度水平；其中應包含IgM/IgG單獨陽(yáng)性和雙陽(yáng)性的樣本。

5.1.4.2陰性參考品

陰性參考品應考慮檢測特異性的評價(jià)，應納入類(lèi)風(fēng)濕因子陽(yáng)性樣本及其他病原體特異性抗體陽(yáng)性樣本。

5.1.4.3檢出限參考品

可設置臨床陽(yáng)性樣本的系列稀釋樣本，其中應包含檢出限水平, IgM和IgG分別設置。

5.1.4.4重復性參考品

建議包括高、低兩個(gè)濃度的臨床樣本，其中一個(gè)濃度應為檢出限附近的濃度。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1產(chǎn)品基本反應原理介紹。

5.2.2生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并提交研究資料說(shuō)明每一步驟生產(chǎn)工藝的研究確定資料。

5.2.3包被/標記工藝研究，申請人應考慮如包被/標記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗確定上述指標的最佳組合。

5.2.4顯色系統、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

（四）臨床評價(jià)資料

臨床試驗的開(kāi)展、方案的制定以及報告的撰寫(xiě)等均應符合相關(guān)法規及《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》的要求，如相關(guān)法規、文件有更新，臨床試驗應符合更新后的要求。

1.臨床研究單位的選擇

應選擇不少于3家（含3家）經(jīng)醫療器械臨床試驗機構備案的臨床試驗機構，按照相關(guān)法規、指導原則的要求開(kāi)展臨床試驗。臨床試驗機構的選擇應充分考慮擬申報產(chǎn)品的特點(diǎn)和預期用途，綜合流行病學(xué)背景，建議選擇不同地區的臨床試驗機構開(kāi)展臨床試驗，使臨床試驗機構和受試者的選擇具有一定的地域代表性。且臨床試驗機構應具有免疫學(xué)方法和微生物培養檢測的優(yōu)勢，實(shí)驗操作人員應有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統的各環(huán)節，熟悉臨床試驗方案。

2.臨床試驗方法

2.1如有已上市同類(lèi)產(chǎn)品的，建議申請人選擇境內已批準上市的同類(lèi)產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗體外診斷試劑與之進(jìn)行對比試驗研究，評價(jià)申報產(chǎn)品的臨床性能。對比試劑的選擇應從預期用途、樣本要求、檢測性能等方面，確認其與申報產(chǎn)品具有較好的可比性。

如無(wú)已上市同類(lèi)產(chǎn)品，申請人可選擇臨床參考標準進(jìn)行比較研究。臨床參考標準即按照國家衛生健康委員會(huì )發(fā)布的《布魯氏菌病診斷 WS 269-2019》等文件進(jìn)行病例診斷的方法。

2.2 針對IgM檢測，還應進(jìn)行一定量的新鮮樣本與布魯氏菌培養鑒定方法進(jìn)行比較，培養鑒定的方法應參照按照國家衛生健康委員會(huì )發(fā)布的《布魯氏菌病診斷 WS 269-2019》，培養時(shí)間建議不少于14天。對于培養陽(yáng)性而IgM檢測陰性的病例應進(jìn)一步隨訪(fǎng)其IgM的檢測情況，并結合IgG的檢測結果等綜合進(jìn)行分析。對于培養陰性而IgM檢測陽(yáng)性的病例建議進(jìn)一步確認病例的感染狀態(tài)。針對不一致的樣本，應綜合以上因素進(jìn)行分析。

2.3 對于無(wú)已上市同類(lèi)產(chǎn)品的試劑，為了進(jìn)一步充分評價(jià)申報產(chǎn)品的臨床檢測性能，申請人還應納入至少10例患者的連續收集的樣本進(jìn)行研究，應涵蓋不同的疾病階段，考察申報產(chǎn)品IgM和IgG的檢測性能，該部分病例應包括一定數量的IgM、IgG陽(yáng)轉的病例。

3.受試者選擇和樣本類(lèi)型

3.1受試者選擇

入組人群應以疑似病例為主，應具有相應的流行病學(xué)史以及相關(guān)的臨床癥狀及體征，如持續數日乃至數周發(fā)熱（包括低熱），多汗，乏力，肌肉和關(guān)節疼痛等，肝、脾、淋巴結腫大等。還應包括各種可能的干擾樣本、交叉反應樣本（其它病原體陽(yáng)性）等。

應注意，入組人群應包括疾病的不同階段，急性期（3個(gè)月以?xún)龋?、亞急性期?~6個(gè)月）、慢性期（超過(guò)6個(gè)月）。應納入初次感染以及復發(fā)/再感染的病例。

3.2 樣本類(lèi)型

布魯氏菌抗體檢測試劑適用的樣本類(lèi)型一般包括血清、血漿、靜脈全血等。對于不同的樣本類(lèi)型，如臨床前研究證實(shí)檢測性能沒(méi)有差異（如血清、血漿），則臨床試驗中可匯總統計。

如產(chǎn)品適用的不同樣本類(lèi)型差異較大（如：血清/血漿與靜脈全血），建議針對不同樣本類(lèi)型進(jìn)行同源比對，亦可分別按照臨床試驗設計與已上市同類(lèi)產(chǎn)品或臨床參考標準進(jìn)行比對。

4. 臨床試驗樣本量

臨床試驗樣本量應滿(mǎn)足統計學(xué)要求，可采用適當的統計學(xué)方法進(jìn)行估算。根據相應臨床試驗設計，本臨床試驗可依據申報產(chǎn)品相對于對比試劑的陰、陽(yáng)性符合率分別估算最低陰、陽(yáng)性樣本例數。

4.1與已上市同類(lèi)產(chǎn)品作為對比試劑的比較研究中，臨床樣本量的估算建議采用單組目標值法進(jìn)行計算，陰陽(yáng)性符合率的臨床可接受標準（P0）建議不低于90%。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著(zhù)性水平和把握度的標準正態(tài)分布的分數位，P0為評價(jià)指標的臨床可接受標準，PT為考核試劑評價(jià)指標預期值。

臨床試驗總體樣本量確定時(shí)應在上述陰、陽(yáng)性樣本最低樣本量估算的基礎上，同時(shí)考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及可能需要納入的干擾樣本、交叉反應樣本等情況適當增加入組樣本量。

4.2與臨床參考標準的比較研究，建議參考與對比方法/試劑比較研究部分的樣本量估算方法，設定合理的臨床可接受標準。

4.3與布魯氏菌培養鑒定比較研究，應入組一定數量的陽(yáng)性及陰性病例，考察試驗體外診斷試劑與布魯氏菌培養鑒定的一致性，納入的例數也應進(jìn)行統計學(xué)估算，可采用抽樣精度的公式進(jìn)行樣本量估算。

4.4 如申報產(chǎn)品適用于不同樣本類(lèi)型，臨床試驗需進(jìn)行不同樣本類(lèi)型（如血清/血漿與全血）的同源比對時(shí)，樣本例數應滿(mǎn)足統計學(xué)要求，建議每種樣本類(lèi)型的陽(yáng)性和陰性樣本例數均不少于70例。

5.統計學(xué)分析

應選擇合適的統計方法對臨床試驗結果進(jìn)行統計分析，對于申報產(chǎn)品與對比試劑/臨床參考標準的一致性評價(jià)，常選擇交叉四格表形式總結兩種方法的結果，評價(jià)指標一般包括陽(yáng)性符合率/陰性符合率、靈敏度/特異度，Kappa值等，并計算相應的95%置信區間。同時(shí)應針對疾病的不同階段進(jìn)行亞組分析。

對于IgM和IgG聯(lián)檢的產(chǎn)品，應分別針對IgM、IgG以及二者聯(lián)檢與對比試劑/臨床參考標準進(jìn)行統計分析。

臨床試驗中不一致結果均應結合患者的流行病學(xué)背景、臨床癥狀、患者的免疫狀態(tài)、疾病轉歸以及其他檢驗結果等信息進(jìn)行充分的分析。

6.倫理學(xué)要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準則。研究者應考慮臨床試驗用樣本的獲得和試驗結果對受試者的風(fēng)險，提請倫理委員會(huì )審查，并獲得倫理委員會(huì )的同意。注冊申報時(shí)應提交倫理委員會(huì )的審查意見(jiàn)。

7.臨床試驗方案

臨床試驗實(shí)施前，研究人員應從流行病學(xué)、統計學(xué)、臨床醫學(xué)、檢驗醫學(xué)等多方面考慮，設計科學(xué)合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機構應執行統一的臨床試驗方案，且保證在整個(gè)臨床試驗過(guò)程中遵循預定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗過(guò)程應在臨床試驗機構的實(shí)驗室內并由本實(shí)驗室的技術(shù)人員操作完成，申請人的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導外，不得隨意干涉實(shí)驗進(jìn)程，尤其是數據收集過(guò)程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗都應記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗操作過(guò)程中和判定試驗結果時(shí)應采用盲法以保證試驗結果的客觀(guān)性。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗開(kāi)始前，建議進(jìn)行臨床試驗的預試驗，以熟悉并掌握相關(guān)試驗方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗誤差。整個(gè)試驗過(guò)程都應處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數據的準確性及精密度。

9.臨床試驗報告撰寫(xiě)

臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應該對整個(gè)臨床試驗實(shí)施過(guò)程、結果分析、結論等進(jìn)行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數據和統計分析方法，最后得出臨床試驗結論。臨床試驗報告的撰寫(xiě)參考《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》及《體外診斷試劑臨床試驗報告范本》的相關(guān)要求。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和標簽樣稿

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)格式應滿(mǎn)足《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中技術(shù)內容應與注冊申報資料中的相關(guān)研究結果保持一致，如某些內容引用自參考文獻，應以規范格式進(jìn)行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)應重點(diǎn)關(guān)注以下內容：

1.【預期用途】

產(chǎn)品預期用途的描述應符合現行的疾病防治指南，其臨床試驗入組病例應能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。建議產(chǎn)品預期用途包括如下內容：

本產(chǎn)品用于體外定性檢測人血清/血漿/全血樣本中的布魯氏菌的IgM/IgG抗體。

用于布魯氏菌感染的輔助診斷。本試劑盒檢測結果僅供臨床參考，建議結合患者臨床表現和其他實(shí)驗室檢測結果對病情進(jìn)行綜合分析。

2.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內容：

2.1樣本采集：明確采集時(shí)間、采集順序、采集量等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。說(shuō)明采集方法及樣本類(lèi)型，對于血漿、全血樣本，應注明對抗凝劑的要求。

2.2干擾物的影響：明確常見(jiàn)干擾物對實(shí)驗結果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。

2.3樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測前是否需要恢復室溫，冷凍樣本的凍融次數限制等。

3.【檢驗方法】

詳細說(shuō)明試驗操作的各個(gè)步驟：

3.1試驗環(huán)境：實(shí)驗室的溫度、濕度要求，檢測試劑及樣本的復溫要求等。

3.2試劑配制方法，試劑開(kāi)封后使用方法等。

3.3高濃度樣本稀釋的方法。

3.4試驗條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長(cháng)等。

3.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結果的要求（試驗有效性的判斷），質(zhì)控結果不符合要求的處理方式。

3.6對于膠體金法檢測試劑可以圖示形式顯示正確的檢驗操作方法、程序等。特別注意應強調操作溫度及濕度條件、讀取結果的時(shí)間范圍。

3.7特別說(shuō)明檢驗操作過(guò)程中的注意事項。

4.【陽(yáng)性判斷值】（如適用）

明確陽(yáng)性判斷值，簡(jiǎn)要描述陽(yáng)性判斷值確定的試驗方法。

5.【檢驗結果的解釋】

結合質(zhì)控線(xiàn)/對照品/質(zhì)控品/校準品以及樣本的檢測結果，對所有可能出現的結果組合及相應的解釋進(jìn)行詳述。對于膠體金法檢測試劑可采用圖示形式描述結果判讀方法。如有灰區判定，詳細說(shuō)明灰區樣本的處理方法。

6.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明，建議包括以下內容：

6.1本產(chǎn)品檢測結果僅供臨床參考，不應作為臨床診治的唯一依據，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗室檢測、治療反應及流行病學(xué)等信息綜合考慮。

6.2不合理的樣本采集、轉運、處理及不當的實(shí)驗操作和實(shí)驗環(huán)境均有可能導致假陰性或假陽(yáng)性結果。

6.3由于細菌感染到機體產(chǎn)生特異性抗體需經(jīng)一定時(shí)間，抗體的滴度水平存在個(gè)體差異等，應綜合考慮IgM抗體檢測結果、IgG抗體檢測結果、染疫的家畜及其制品接觸史、涉疫區史、臨床表現等進(jìn)行疾病診斷。

6.4評價(jià)血清學(xué)檢測結果時(shí)需要結合患者的臨床病程、基礎狀況（免疫狀態(tài)）以及年齡等因素綜合考慮，如：免疫功能低下、缺陷或免疫功能受抑制的人群、產(chǎn)生抗體能力較低的嬰幼兒，可能不產(chǎn)生或產(chǎn)生低滴度的抗體，其血清學(xué)抗體檢測的參考價(jià)值有限，可能會(huì )導致錯誤的醫學(xué)解釋。

6.5在近幾個(gè)月內接受過(guò)輸血或其他血液制品治療的人群，對其陽(yáng)性檢測結果的分析應慎重。

6.6該產(chǎn)品為定性檢測產(chǎn)品，結果并不能準確反映布魯氏菌IgM /IgG抗體的滴度。

6.7其他需要說(shuō)明的局限性等。

7.【產(chǎn)品性能指標】

簡(jiǎn)述以下性能指標：

7.1企業(yè)參考品符合率。

7.2檢出限：簡(jiǎn)要介紹評價(jià)方法、所用樣本情況以及評價(jià)結果。

7.3對包容性的研究情況進(jìn)行總結。

7.4對精密度的研究情況進(jìn)行總結。

7.5分析特異性

7.5.1交叉反應：詳述交叉反應驗證的病原體種類(lèi)，及有/無(wú)交叉反應的濃度水平。

7.5.2干擾試驗：說(shuō)明驗證的干擾物質(zhì)種類(lèi)及有/無(wú)干擾反應的濃度水平。

7.6臨床試驗：簡(jiǎn)要介紹試驗方法、受試者及樣本、試驗結果和結論等。

8.【注意事項】

8.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

8.2明確本試劑盒所采用的生物學(xué)來(lái)源的組分，雖經(jīng)滅活，但不能保證其不具有潛在傳染性，需要嚴格按照生物安全有關(guān)規定操作，遵循實(shí)驗室操作的常規規定。所有樣品、洗滌液（如適用）和各種廢棄物均應按污染物處理。

8.3試劑操作的注意事項，如是否需要平衡至室溫再使用，是否需要搖勻等。不同批號的試劑是否可以混用。

8.4有關(guān)實(shí)驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

三、參考文獻

[1] WS 269—2019，中華人民共和國衛生行業(yè)標準-布魯氏菌病診斷[S] .

[2] 國家衛生計生委辦公廳.全國布魯氏菌病監測工作方案[Z] . 2018-02-23.

[3] MJ　Corbel.人獸布魯氏菌病[M].北京:人民軍醫出版社,2015.

[4] Pablo Yagupsky, Laboratory Diagnosis of Human Brucellosis [J]. Clinical Microbiology Reviews，2019，Vol. 33, No. 1.

附件

背景信息

布魯氏菌屬（Brucella）是胞內寄生的革蘭氏陰性菌，為球桿菌或短桿菌。布魯氏菌?。˙rucellosis，簡(jiǎn)稱(chēng)布?。┦怯刹剪斒暇鷮俚募毦秩霗C體，引起的人獸共患的傳染性疾病。常見(jiàn)的病原體包括羊種布魯氏菌（B. melitensis，也稱(chēng)馬耳他布魯氏菌）生物型1～3，牛種布魯氏菌(B. abortus，也稱(chēng)流產(chǎn)布魯氏菌)生物型1～7和9，豬種布魯氏菌生物型1～5及綿羊附睪種布魯氏菌（B. ovis）、沙林鼠種布魯氏菌（B. neotomae）、犬種布魯氏菌(B. canis)各1個(gè)生物型，共6個(gè)種19個(gè)生物型。布魯氏菌病是人畜共患的傳染??；疫畜是布魯氏菌病的主要傳染源，包括羊、牛、豬和犬等。人類(lèi)對布魯氏菌普遍易感，布魯氏菌通過(guò)職業(yè)、環(huán)境接觸感染動(dòng)物及其制品等途徑而傳播給人。布魯氏菌病常見(jiàn)的臨床表現包括發(fā)熱、多汗、乏力和肌肉關(guān)節疼痛等，急性期病例多出現肝、脾及淋巴結腫大，男性病例可伴有睪丸炎，女性病例可見(jiàn)卵巢炎；如果治療不及時(shí)或不規范，容易由急性轉為慢性，慢性期患者表現為骨關(guān)節系統的損害等。

布魯氏菌病的潛伏期一般為1-3周。病程在3個(gè)月內為急性期；3～6個(gè)月為亞急性期；6個(gè)月以上為慢性期，均出現血清學(xué)抗體陽(yáng)性反應。感染的早期階段，開(kāi)始出現特異性IgM 抗體，然后出現特異性IgG 抗體，隨病程進(jìn)展持續升高；部分急性期患者特異性IgM 抗體出現較晚，治愈后特異性IgG 抗體持續存在。疾病復發(fā)時(shí)，通常特異性IgG 抗體的滴度快速升高，特異性IgM 抗體可升高或不升高。在慢性病例中，特異性IgM 抗體的滴度逐漸下降，特異性IgG 抗體持續存在。

布魯氏菌的實(shí)驗室檢查方法分為初篩試驗和確證試驗；前者包括虎紅平板凝集試驗、膠體金免疫層析試驗（GICA）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和布魯氏菌培養物涂片革蘭染色等，后者包括標準試管凝集試驗（SAT）、抗人免疫球蛋白試驗（Coomb’s）、補體結合試驗（CFT)以及布魯氏菌的分離培養和鑒定。IgM 和 IgG 的檢測結果可以作為區分近期感染和既往感染的參考。布魯氏菌病的診斷應根據流行病學(xué)史、臨床表現及實(shí)驗室檢查結果進(jìn)行綜合判斷。