體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產(chǎn)品按照GB16886.1進行了生物學評價后還應進行鼠胚試驗嗎？

聊聊一個在體外輔助生殖（ART）用耗材注冊過程中經(jīng)常被問到的問題：對于那些用于操作配子（精子和卵子）、合子（受精卵）以及不同發(fā)育階段胚胎細胞的耗材產(chǎn)品（注意啊，這里明確排除了培養(yǎng)液之類的液體產(chǎn)品），當我們已經(jīng)按照國家標準GB16886.1《醫(yī)療器械生物學評價 第1部分：風險管理過程中的評價與試驗》完成了全套的生物學評價后，是不是就萬事大吉了？還需要額外做那個聽起來就挺專業(yè)的“鼠胚試驗”嗎？這個問題直接關系到產(chǎn)品的安全性和能否順利注冊上市，咱們必須得弄明白。答案其實很明確：必須做！這不是可選項，而是法規(guī)和標準要求的強制性補充評價。為什么呢？咱們往下看就清楚了。這些耗材直接接觸的是生殖過程中最敏感、最脆弱的細胞——人類的精卵和早期胚胎。GB16886.1提供的是基礎、通用的生物學安全評價框架，但它并不能完全模擬和覆蓋這些特殊細胞在體外復雜培養(yǎng)環(huán)境中可能面臨的、由器械材料或工藝帶來的特定風險。想想看，一個微小的毒性反應或不利影響，對普通組織可能沒啥，但對一個正在努力分裂發(fā)育的早期胚胎來說，可能就是滅頂之災。所以，為了確保這些關鍵耗材對胚胎發(fā)育真正安全無害，光做常規(guī)生物學評價是不夠的，必須加上一道專門為它們設計的“安全鎖”——體外鼠胚試驗。

理解體外輔助生殖用耗材的特殊性

首先得搞清楚我們討論的對象是什么。這里說的耗材，指的是在體外輔助生殖技術操作中，除了培養(yǎng)液、緩沖液等液體之外，那些直接用來接觸、操作、轉移或儲存人類配子（精子、卵子）、合子（受精卵）以及早期胚胎（比如2細胞期、4細胞期、桑葚胚、囊胚等）的器械。常見的例子包括取卵針、胚胎移植管、顯微操作針（ICSI針）、培養(yǎng)皿、離心管、移液管頭（特定用于生殖細胞操作的）、卵母細胞/胚胎冷凍載桿等等。這些產(chǎn)品的核心特點是：它們的直接作用對象是生殖細胞和早期胚胎。這些細胞不同于體細胞，它們處于生命發(fā)育的最初階段，對外界環(huán)境極其敏感，任何微小的化學物質浸出、物理刺激或表面特性的不適，都可能干擾其正常的受精、分裂、發(fā)育過程，最終影響胚胎質量和妊娠結局。

GB16886.1生物學評價的核心內容和局限性

GB16886.1是我們醫(yī)療器械生物學評價的基石標準。它要求我們從產(chǎn)品的材料、預期用途、與人體接觸的性質（接觸部位、接觸時間）等角度進行全面的風險分析，并據(jù)此選擇必要的生物學試驗項目。常規(guī)的評價項目可能包括細胞毒性試驗（看材料會不會直接毒死細胞）、致敏試驗（看會不會引起過敏）、刺激或皮內反應試驗（看對組織有沒有刺激性）、急性全身毒性試驗、遺傳毒性試驗（看會不會損傷DNA）、植入后局部反應試驗（針對長期植入物）等等。這些試驗非常重要，覆蓋了醫(yī)療器械生物學安全的主要方面。但是，它們存在一個關鍵的局限性：這些試驗使用的測試系統(tǒng)（如L929小鼠成纖維細胞、豚鼠皮膚、兔子肌肉、細菌或哺乳動物細胞系用于遺傳毒性等）無法準確模擬和評估產(chǎn)品對人類生殖細胞和早期胚胎發(fā)育的潛在特異性影響。一個材料對成纖維細胞沒有毒性，不代表它對小鼠或人類的早期胚胎也沒有不良影響。胚胎發(fā)育是一個高度復雜和精密調控的過程，有其獨特的敏感性和易損性。常規(guī)的生物學試驗模型無法捕捉到這種針對胚胎發(fā)育的特異性毒性風險。

為什么必須進行鼠胚試驗？法規(guī)與標準要求

正是基于上述的特殊性和常規(guī)評價的局限性，國內外監(jiān)管機構和標準組織都明確要求，對于直接接觸配子和胚胎的ART用耗材（液體產(chǎn)品有類似但不同的要求），在完成GB16886.1要求的生物學評價后，必須額外進行體外鼠胚試驗。這并非可有可無，而是強制性的安全評價環(huán)節(jié)。國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術審評中心（器審中心）在歷次發(fā)布的注冊問題答疑中反復強調這一點。例如，在器審中心發(fā)布的答疑中明確指出：“體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產(chǎn)品的作用對象是配子、合子及不同發(fā)育階段的胚胎細胞，除常規(guī)生物學評價外，還應參照YY/T1434-2016進行體外鼠胚試驗?！?這個要求在北京、上海等地的醫(yī)療器械審評檢查常見問題解答中也被多次重申。

鼠胚試驗的執(zhí)行標準：YY/T1434-2016

這項強制性試驗的具體操作方法和要求，詳細規(guī)定在國家醫(yī)藥行業(yè)標準 YY/T1434-2016《人類體外輔助生殖技術用醫(yī)療器械 體外鼠胚試驗》中。這個標準是專門為評價ART醫(yī)療器械（包括耗材和用液）對胚胎發(fā)育的潛在毒性而制定的。它的核心原理是：利用小鼠的早期胚胎（1-細胞受精卵或2-細胞胚胎）作為模型，在體外培養(yǎng)過程中，模擬該耗材產(chǎn)品在實際ART操作中的使用方式（例如，將耗材的浸提液加入培養(yǎng)環(huán)境，或直接用耗材接觸胚胎），觀察這些胚胎能否在設定的培養(yǎng)時間內（通常1-細胞胚胎培養(yǎng)96小時，2-細胞胚胎培養(yǎng)72小時）正常發(fā)育到囊胚階段，并評估形成的囊胚質量。通過比較供試品組（使用待測耗材）、陰性對照組（使用已知安全的培養(yǎng)液和耗材）和陽性對照組（使用已知有毒性的物質）的囊胚形成率和囊胚質量，來判斷待測耗材是否對胚胎發(fā)育存在潛在毒性。

鼠胚試驗的關鍵步驟概述

1.試驗準備：

（1）供試品處理： 根據(jù)待測耗材的形態(tài)（固體/器具）和預期接觸方式（如接觸時間長短），按照GB/T 16886.12和YY/T 1434的要求制備供試品浸提液。推薦使用M16培養(yǎng)液作為浸提介質。

（2）對照組設置：必須設立陰性對照組（通常使用M2/M16培養(yǎng)液及已知安全的耗材）和陽性對照組（使用經(jīng)驗證對胚胎有毒性的物質）。陽性對照用于證明試驗系統(tǒng)的敏感性，陰性對照用于提供正常發(fā)育的基線。

（3）試驗動物與胚胎獲取：選用6-8周齡健康雌鼠，通過激素（PMSG和hCG）注射誘導超數(shù)排卵，并與同品系雄鼠交配。在注射hCG后特定時間點（取1-細胞胚胎約18-22小時，取2-細胞胚胎約40-48小時）處死孕鼠，從輸卵管中收集胚胎。推薦優(yōu)先使用1-細胞胚胎。

（4）培養(yǎng)皿準備：在培養(yǎng)皿中制備覆蓋培養(yǎng)用油的培養(yǎng)液微滴（30-50μL），并在CO2培養(yǎng)箱中預平衡。

2.胚胎分組與培養(yǎng)：

（1）將收集到的形態(tài)正常的胚胎（每組通常不少于50個，且來自3-5只不同母鼠的胚胎應隨機分配到各組）隨機分配到供試品組、陰性對照組和陽性對照組。

（2）將胚胎置于已平衡好的相應培養(yǎng)液（供試液、陰性對照液、陽性對照液）微滴中。

（3）在嚴格控制的環(huán)境下（37°C, 5%或6% CO2, 飽和濕度）進行體外培養(yǎng)。1-細胞胚胎培養(yǎng)至96小時，2-細胞胚胎培養(yǎng)至72小時。

3.結果觀察與判定：

（1）在培養(yǎng)結束時，在顯微鏡下觀察并記錄各組發(fā)育到囊胚階段的胚胎數(shù)量，計算囊胚形成率。

（2）評估形成的囊胚質量，區(qū)分發(fā)育良好的囊胚（囊胚腔充分擴張，內細胞團大小適中，滋養(yǎng)層細胞緊密均勻）和發(fā)育差的囊胚（囊胚腔小，內細胞團小或無，滋養(yǎng)層細胞稀疏）。

（3）標準（YY/T1434）通常要求供試品組的囊胚形成率需達到陰性對照組的一定比例（例如不低于80%或具體標準規(guī)定值），且囊胚質量應良好，才能判定該耗材在本試驗條件下對鼠胚發(fā)育無潛在毒性。需要與陰性和陽性對照組的結果進行統(tǒng)計學比較分析。

進行鼠胚試驗的注意事項

（1）實驗室條件：試驗必須在具備嚴格環(huán)境控制（潔凈度、溫濕度）的專業(yè)生殖實驗室進行，避免環(huán)境因素干擾。

（2）試驗設計嚴謹性：

（3）樣品代表性：建議測試樣品應覆蓋不同生產(chǎn)批次，特別是零時刻（剛生產(chǎn)）和貨架有效期終點的產(chǎn)品，以評估產(chǎn)品老化及與包裝容器相互作用的影響。

（4）設置上市產(chǎn)品對照：強烈建議在試驗中增設一個已上市同類產(chǎn)品作為對照組（除陰性和陽性對照外）。這有助于在試驗結果出現(xiàn)異常時進行更準確的判定，并為試驗質量提供參照。目前很多提交的報告中缺乏此項。

（5）接觸方式模擬：試驗步驟（特別是供試品與胚胎的接觸時間、接觸方式）應盡可能模擬該耗材在人類ART實際操作中的使用情況。YY/T1434的附錄B提供了針對不同接觸時間耗材的試驗策略指導。例如，胚胎移植管接觸時間短，其試驗設計就應與培養(yǎng)皿（長時間接觸）不同。

（6）試劑耗材安全性：試驗中使用的所有基礎培養(yǎng)液、耗材（如培養(yǎng)皿、移液管頭）等，理論上都應是已通過鼠胚試驗驗證安全無毒的。實際操作中這可能有難度，但應盡量選擇來源可靠、背景清晰的材料。

結論

所以，回到最初的問題：“體外輔助生殖用耗材（體外輔助生殖用液除外）產(chǎn)品按照GB16886.1進行了生物學評價后還應進行鼠胚試驗嗎？” 答案是肯定的、必須的。GB16886.1是基礎，提供了通用的生物學安全框架。但對于這些直接接觸人類生命起點的、極其脆弱的生殖細胞和早期胚胎的特殊耗材，僅靠基礎評價遠遠不夠。YY/T1434-2016規(guī)定的體外鼠胚試驗是法規(guī)和標準明確要求的、針對胚胎發(fā)育特異性毒性的關鍵評價手段。它利用小鼠胚胎模型，模擬實際操作環(huán)境，直觀評估耗材對胚胎分裂、發(fā)育直至形成囊胚能力的影響。只有通過了這項嚴格的“胚胎安全測試”，并結合GB16886.1的全面評價結果，才能更有力地證明這類耗材在生物學上是安全的，才能為它們在體外輔助生殖技術中的安全應用提供堅實的科學依據(jù)，最終支持其成功注冊上市。

希望這篇文章能清晰解答您的疑問。如果您在具體產(chǎn)品的注冊申報過程中遇到鼠胚試驗的設計或實施問題，思途CRO的專業(yè)團隊可以提供符合法規(guī)要求的支持服務。