抗核抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年第14號(hào)）

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抗核抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)抗核抗體（Antinuclear antibody，ANA）檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)抗核抗體檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

抗核抗體作為自身免疫?。╝utoimmune diseases，AID）重要的生物學(xué)標(biāo)志，是臨床應(yīng)用中最廣泛、最基礎(chǔ)的一組自身抗體。臨床常見(jiàn)于系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）、干燥綜合征、系統(tǒng)性硬化病、混合結(jié)締組織病及多發(fā)性肌炎/皮肌炎等系統(tǒng)性（非器官特異性）AID患者。同時(shí)，ANA可見(jiàn)于器官特異性AID患者，如自身免疫性肝病、自身免疫性甲狀腺炎等。除此之外，ANA也可見(jiàn)于慢性感染性疾病及健康人群中。

細(xì)胞核是ANA靶抗原所在的最重要的結(jié)構(gòu)部位，因此傳統(tǒng)意義上的ANA是指抗細(xì)胞核抗原成分的自身抗體總稱。隨著檢測(cè)技術(shù)的改進(jìn)，尤其是培養(yǎng)細(xì)胞抗原基質(zhì)（如HEp-2細(xì)胞）的廣泛應(yīng)用，ANA的定義擴(kuò)展到以真核細(xì)胞各種成分（包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架蛋白及細(xì)胞分裂周期蛋白等）為靶抗原的自身抗體的總稱。

目前，ANA檢測(cè)分成ANA總抗體的檢測(cè)和針對(duì)靶抗原的特異性自身抗體檢測(cè)。其中，ANA總抗體的檢測(cè)方法主要包括間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）、酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）等。ANA特異性自身抗體檢測(cè)方法主要包括ELISA法、線性免疫印跡法（line immunoassay，LIA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）等。

本指導(dǎo)原則所述抗核抗體檢測(cè)試劑是指利用間接免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附法、化學(xué)發(fā)光法、線性免疫印跡法等基于抗原抗體反應(yīng)原理，針對(duì)人血清、血漿樣本中總抗核抗體或針對(duì)靶抗原的特異性自身抗體進(jìn)行體外定性和/或半定量和/或定量檢測(cè)的試劑。同時(shí)，本指導(dǎo)原則是針對(duì)抗核抗體檢測(cè)試劑的通用指導(dǎo)原則，申請(qǐng)人應(yīng)結(jié)合具體產(chǎn)品的特點(diǎn)進(jìn)行申報(bào)。如果申報(bào)產(chǎn)品有具體指導(dǎo)原則，應(yīng)參照?qǐng)?zhí)行。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行注冊(cè)申請(qǐng)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號(hào)），抗核抗體及針對(duì)靶抗原的特異性自身抗體檢測(cè)試劑屬于自身抗體檢測(cè)試劑，管理類別為Ⅱ類6840。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

注冊(cè)申報(bào)資料的撰寫應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱44號(hào)公告）的相關(guān)要求。

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。其中，需注意以下內(nèi)容：

1.臨床適應(yīng)癥背景情況

應(yīng)對(duì)申報(bào)的每一個(gè)抗核抗體具體項(xiàng)目進(jìn)行詳細(xì)的描述，分別闡述每個(gè)靶抗原特異性自身抗體的具體特點(diǎn)及相應(yīng)臨床適應(yīng)癥信息，包括適應(yīng)癥的發(fā)生率、適用人群等。說(shuō)明具體的臨床意義，例如：是否用于輔助診斷、鑒別診斷、分型及疾病活動(dòng)性監(jiān)測(cè)等。介紹相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.同類產(chǎn)品上市情況

應(yīng)著重從技術(shù)方法、主要原材料、檢測(cè)限、陽(yáng)性判斷值或參考區(qū)間等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

3.關(guān)于抗DNA抗體的幾點(diǎn)考慮

3.1如產(chǎn)品聲稱用于高親和力抗ds-DNA抗體檢測(cè)，應(yīng)描述如何證明產(chǎn)品僅針對(duì)高親和力抗體進(jìn)行檢測(cè)。

3.2如產(chǎn)品包括對(duì)抗單鏈DNA（ss-DNA）抗體的檢測(cè)，并同時(shí)聲稱具備檢測(cè)抗ds-DNA抗體的能力，應(yīng)說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果需結(jié)合抗ds-DNA抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行解釋，并對(duì)解釋時(shí)的難點(diǎn)進(jìn)行分析。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

若主要原材料為申請(qǐng)人自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須穩(wěn)定；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供的資料包括：供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告以及申請(qǐng)人對(duì)到貨后主要原材料的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

1.抗原

應(yīng)詳述抗原的名稱及生物學(xué)來(lái)源，如為外購(gòu)抗原，則應(yīng)提供外購(gòu)方名稱，外購(gòu)方出具的抗原性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請(qǐng)人對(duì)該抗原技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)。如為企業(yè)自制抗原，對(duì)于天然抗原，則應(yīng)提供抗原提取及純化、鑒定等實(shí)驗(yàn)過(guò)程予以詳述；對(duì)于重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、基因序列、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、抗原表達(dá)及抗原純化、鑒定等詳細(xì)內(nèi)容。

2.其他主要原輔料

應(yīng)提交各種原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如二抗、工具酶、固相載體、化學(xué)發(fā)光劑、反應(yīng)緩沖液等，如為外購(gòu)，應(yīng)詳述每一原輔料的外購(gòu)方名稱，提交外購(gòu)方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請(qǐng)人對(duì)每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。

3.校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（如有）

應(yīng)包括原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料。校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國(guó)家或國(guó)際參考品（如有）。質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽(yáng)性兩個(gè)水平。陽(yáng)性質(zhì)控品可選擇臨床陽(yáng)性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本或緩沖溶液等。

4.企業(yè)內(nèi)部參考品

如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國(guó)家參考品，則企業(yè)內(nèi)部參考品應(yīng)參考國(guó)家參考品的項(xiàng)目設(shè)置，且不低于國(guó)家參考品要求。若無(wú)國(guó)家參考品，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)定企業(yè)內(nèi)部參考品。

應(yīng)提交企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認(rèn)等相關(guān)驗(yàn)證資料。說(shuō)明參考品陰陽(yáng)性及濃度/滴度確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國(guó)內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）。濃度確認(rèn)應(yīng)采用國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行溯源（如有）。企業(yè)內(nèi)部參考品的基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同。針對(duì)多項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)試劑，應(yīng)分別對(duì)每一個(gè)靶抗原特異性自身抗體項(xiàng)目進(jìn)行研究。

對(duì)于IIF-ANA檢測(cè)試劑，企業(yè)內(nèi)部參考品至少應(yīng)包括：陰性參考品、陽(yáng)性參考品和精密度參考品。其中，陽(yáng)性參考品應(yīng)充分考慮可報(bào)告熒光模型的驗(yàn)證（至少包括均質(zhì)型、胞漿顆粒型、分裂期細(xì)胞著絲點(diǎn)型等三種熒光模型），可選擇多份確認(rèn)為陽(yáng)性的臨床樣本，并設(shè)置不同滴度水平。陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)，適當(dāng)納入其他AID特異性自身抗體陽(yáng)性樣本。精密度參考品應(yīng)至少設(shè)置一個(gè)弱陽(yáng)性水平參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

生產(chǎn)工藝主要包括：各組分制備工藝的研究，包括試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定依據(jù)等。反應(yīng)體系主要包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件等確定的依據(jù)，以及校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法。

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.主要生產(chǎn)工藝過(guò)程的研究資料，每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

3.主要反應(yīng)體系的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)，包括樣本采集及處理、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法等。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒所有的分析性能進(jìn)行研究的資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的研究都應(yīng)包括研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)研究背景信息也應(yīng)在資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)和臨床樣本來(lái)源等。分析性能評(píng)估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)國(guó)內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

1.檢測(cè)限

申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法研究擬申報(bào)試劑的檢測(cè)限。

1.1定性/半定量檢測(cè)試劑

對(duì)檢測(cè)限國(guó)家參考品或生產(chǎn)企業(yè)提供的參考品進(jìn)行檢測(cè)，濃度高于檢測(cè)限參考品應(yīng)檢出陽(yáng)性，濃度低于檢測(cè)限參考品應(yīng)檢出陰性，檢測(cè)限參考品可檢出陰性或陽(yáng)性。

1.2定量檢測(cè)試劑

建議參照國(guó)內(nèi)相關(guān)性能評(píng)估文件或EP17-A2文件推薦的定義和設(shè)計(jì)方案，對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的空白限（LoB）、檢出限（LoD）以及定量限（LoQ）進(jìn)行合理評(píng)估和驗(yàn)證。

2.精密度

針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

2.1對(duì)于半定量/定量檢測(cè)試劑，在可報(bào)告濃度范圍內(nèi)，至少應(yīng)在接近醫(yī)學(xué)決定水平（cut-off值）濃度點(diǎn)以及陽(yáng)性水平濃度點(diǎn)進(jìn)行精密度的評(píng)價(jià)。對(duì)于定性檢測(cè)試劑，至少應(yīng)選擇接近c(diǎn)ut-off值的樣本進(jìn)行精密度的評(píng)價(jià)。

2.2合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

2.3對(duì)于采用新技術(shù)進(jìn)行的試驗(yàn)，或需要對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行主觀解釋時(shí)，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

3.線性范圍

對(duì)于定量或半定量檢測(cè)的試劑，建議通過(guò)檢測(cè)已知自身抗體濃度的樣本來(lái)描述產(chǎn)品測(cè)試的線性范圍。在產(chǎn)品的設(shè)計(jì)研究描述中，建議包含樣本類型、準(zhǔn)備方法、樣本濃度、測(cè)試重復(fù)數(shù)以及采用的統(tǒng)計(jì)方法。同時(shí)聲明可接受標(biāo)準(zhǔn)，并通過(guò)數(shù)據(jù)來(lái)證實(shí)研究結(jié)果滿足預(yù)期要求。研究結(jié)果應(yīng)包含線性回歸斜率和截距的95%置信區(qū)間，以及整個(gè)線性范圍內(nèi)的偏差。同時(shí)建議研究結(jié)果中包含不同水平的期望值和觀測(cè)值。

4.準(zhǔn)確度

對(duì)于定量檢測(cè)的試劑，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際情況合理選擇一種或多種方法對(duì)試劑進(jìn)行準(zhǔn)確度研究，如：與國(guó)家/國(guó)際參考品的相對(duì)偏差、方法學(xué)比對(duì)或回收試驗(yàn)等方法。

5.陽(yáng)性/陰性參考品符合率

對(duì)于定性或半定量檢測(cè)的試劑，如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國(guó)家參考品，則企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品應(yīng)參考國(guó)家參考品的項(xiàng)目設(shè)置。在不低于國(guó)家參考品要求的前提下，申請(qǐng)人可以結(jié)合實(shí)際情況設(shè)置合理的內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品。對(duì)于沒(méi)有國(guó)家參考品的產(chǎn)品，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況自行設(shè)定企業(yè)內(nèi)部參考品，陽(yáng)性參考品應(yīng)著重考慮抗體滴度要求，陰性參考品則主要涉及對(duì)分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。

申請(qǐng)人應(yīng)提供企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品的來(lái)源、抗體滴度等信息，并提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

6.特異性

6.1交叉反應(yīng)

建議通過(guò)檢測(cè)來(lái)自其它自身免疫性疾病患者的臨床樣本，來(lái)評(píng)價(jià)試驗(yàn)的特異性，并在提交的申報(bào)資料中詳述產(chǎn)品的研究設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)結(jié)果。

6.2干擾物質(zhì)

6.2.1內(nèi)源性干擾

對(duì)樣本中常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素、類風(fēng)濕因子（RF）、干擾抗體（如人抗鼠抗體，human anti-mouse antibodies，HAMA）等。建議對(duì)抗核抗體陰性、弱陽(yáng)性（臨界濃度）的臨床樣本或模擬添加樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證，以確定可接受干擾物質(zhì)的濃度。

6.2.2抗凝劑的干擾（如有）

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究。

7.鉤狀（Hook）效應(yīng)

需采用高濃度自身抗體陽(yáng)性血清進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開(kāi)始檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5次，對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。應(yīng)給出不會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的抗體濃度，并在產(chǎn)品說(shuō)明書上寫明對(duì)鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。

8.溯源性

對(duì)于企業(yè)內(nèi)部參考品、校準(zhǔn)品均應(yīng)提供詳細(xì)的溯源資料，包括溯源方法、溯源過(guò)程，溯源過(guò)程中每一步的不確定度的計(jì)算等內(nèi)容。

（五）陽(yáng)性判斷值確定資料

應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明產(chǎn)品陽(yáng)性判斷值（cut-off值）確定的基本原理。包括確定正常人群的數(shù)量與患病人群的數(shù)量所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。如果可能，建議能夠提供評(píng)價(jià)人群的年齡、性別和統(tǒng)計(jì)學(xué)信息。應(yīng)證明采用的cut-off值能夠有效區(qū)分陰、陽(yáng)性樣本。如果檢測(cè)結(jié)果存在可疑區(qū)間，應(yīng)該定義可疑結(jié)果的基礎(chǔ)，并指出可疑結(jié)果如何處理，例如，對(duì)可疑結(jié)果的樣本是否需要進(jìn)行重復(fù)測(cè)試。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及開(kāi)封/開(kāi)瓶穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

樣本穩(wěn)定性研究主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行擬檢測(cè)項(xiàng)目的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果分別應(yīng)在說(shuō)明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）臨床評(píng)價(jià)資料

根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄的通告》（國(guó)家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號(hào)），抗核抗體檢測(cè)試劑可免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)，申請(qǐng)人可依照《免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)資料基本要求（試行）》開(kāi)展評(píng)價(jià)。申請(qǐng)人如無(wú)法或不適于按照上述要求對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開(kāi)展臨床試驗(yàn)。

下面僅對(duì)臨床試驗(yàn)中的基本問(wèn)題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

建議將試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）檢測(cè)結(jié)果與具有相同臨床適應(yīng)癥的已獲批上市產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)。如有條件，建議與公認(rèn)參考方法（例如：以HEp-2細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)基質(zhì)的IIF法是進(jìn)行總ANA檢測(cè)的參考方法和首選方法）進(jìn)行比對(duì)，與參考方法進(jìn)行比對(duì)有助于科學(xué)評(píng)價(jià)考核試劑的性能特性，尤其在與已上市產(chǎn)品方法學(xué)/技術(shù)學(xué)原理方面存在較大差異的時(shí)候。

對(duì)于某些目前臨床上尚不存在明確的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)、亦無(wú)同類產(chǎn)品上市的新ANA標(biāo)志物，臨床試驗(yàn)研究者應(yīng)依據(jù)現(xiàn)有臨床實(shí)踐和理論基礎(chǔ)，建立目前公認(rèn)、合理的方法，進(jìn)行比較研究。臨床試驗(yàn)方法的選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途、檢測(cè)結(jié)果的性質(zhì)（定性或定量等）以及臨床參考標(biāo)準(zhǔn)和對(duì)比試劑的可獲得性等因素進(jìn)行綜合考慮，臨床試驗(yàn)結(jié)論應(yīng)能夠支持預(yù)期用途描述的內(nèi)容。

2.樣本選擇

建議選擇產(chǎn)品可報(bào)告范圍內(nèi)，不同ANA濃度水平的臨床樣本進(jìn)行評(píng)估，包括接近c(diǎn)ut-off值濃度的樣本。凍存（回顧性）樣本如包括相關(guān)信息（如性別、年齡、臨床診斷等），也可用于這些研究。對(duì)樣本入選的納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)進(jìn)行詳盡的描述。

對(duì)于多項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)試劑，每一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，且應(yīng)滿足至少200例的要求，對(duì)于每一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目病例選擇中應(yīng)包括一定數(shù)量的交叉反應(yīng)樣本，以評(píng)價(jià)產(chǎn)品檢測(cè)的特異性。

對(duì)于適用于對(duì)多個(gè)樣本類型進(jìn)行檢測(cè)的產(chǎn)品，如不同樣本類型之間具有可比性，應(yīng)至少完成一個(gè)樣本類型不少于200例的臨床研究，同時(shí)再進(jìn)行不少于100例同源樣本的比較研究。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)于定性和半定量檢測(cè)試劑至少應(yīng)計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率，并以四格表的形式進(jìn)行列表，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的一致性。

對(duì)于半定量檢測(cè)產(chǎn)品還應(yīng)對(duì)檢測(cè)的分級(jí)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，明確分級(jí)存在差異的樣本數(shù)量和分級(jí)差異情況，同時(shí)提供樣本檢測(cè)結(jié)果的頻率分布圖。

對(duì)于定量檢測(cè)試劑除計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總符合率外，還應(yīng)進(jìn)行相關(guān)性分析，給出相關(guān)系數(shù)，進(jìn)行回歸分析，給出回歸方程和試驗(yàn)數(shù)據(jù)的散點(diǎn)圖，回歸分析結(jié)果應(yīng)包括斜率、截距以及95%的置信區(qū)間。

4.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有不一致（檢測(cè)結(jié)果差異較大）的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情、臨床資料對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

對(duì)于半定量檢測(cè)產(chǎn)品，在檢測(cè)結(jié)果陰陽(yáng)性判定一致的情況下，如分級(jí)差異等于或大于2個(gè)級(jí)別，應(yīng)采用第三種方法進(jìn)行復(fù)核。

5.交叉反應(yīng)樣本的比較

對(duì)于選擇的交叉反應(yīng)樣本應(yīng)單獨(dú)列出并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)描述，并對(duì)可能產(chǎn)生交叉反應(yīng)的原因進(jìn)行詳盡描述。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見(jiàn)的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，應(yīng)符合YY/T 0316-2016《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)規(guī)定。如果申報(bào)產(chǎn)品已有適用的國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則產(chǎn)品技術(shù)要求的內(nèi)容應(yīng)不低于適用標(biāo)準(zhǔn)。至少應(yīng)包括以下性能指標(biāo)：

1.定性檢測(cè)試劑：物理性狀、陰性/陽(yáng)性參考品符合率、精密度、檢測(cè)限等。

2.半定量檢測(cè)試劑：物理性狀、陰性/陽(yáng)性參考品符合率、相關(guān)性、精密度、檢測(cè)限等。

3.定量檢測(cè)試劑：物理性狀、準(zhǔn)確度、線性、精密度、檢測(cè)限等。

針對(duì)多項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)試劑，每個(gè)項(xiàng)目均須進(jìn)行陽(yáng)性參考品符合率和精密度的檢測(cè)。性能指標(biāo)及檢驗(yàn)方法中應(yīng)明確寫明陽(yáng)性參考品所包含的檢測(cè)項(xiàng)目。

（十）產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。由其出具檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評(píng)價(jià)意見(jiàn)。

（十一）產(chǎn)品說(shuō)明書和標(biāo)簽

產(chǎn)品說(shuō)明書和標(biāo)簽應(yīng)滿足《醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號(hào)）和《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求。下面對(duì)抗核抗體檢測(cè)試劑說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.【預(yù)期用途】

至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性和/或半定量和/或定量檢測(cè)人血清和/或血漿樣本中的抗核抗體或針對(duì)靶抗原的特異性自身抗體。上述內(nèi)容均應(yīng)有相應(yīng)的分析性能評(píng)估資料和臨床評(píng)價(jià)資料支持。對(duì)于多項(xiàng)目聯(lián)合檢測(cè)試劑，應(yīng)逐項(xiàng)列明所檢測(cè)的具體靶抗原特異性自身抗體項(xiàng)目。

1.2適用人群特征介紹：例如高危人群，臨床疑似或已診斷AID疾病的人群。

1.3說(shuō)明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況。應(yīng)針對(duì)每個(gè)可報(bào)告靶抗原特異性自身抗體項(xiàng)目進(jìn)行編寫。說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【主要組成成分】

2.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度信息。如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說(shuō)明其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2校準(zhǔn)品、質(zhì)控品（陰/陽(yáng)性對(duì)照品）（如有），應(yīng)明確具體基質(zhì)成分，此外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)提交靶值單。

2.3試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封/開(kāi)瓶穩(wěn)定性等信息。注明生產(chǎn)日期、使用期限或失效日期。

4.【樣本要求】

4.1樣本的類型：明確適用的樣本類型以及所用的抗凝劑或保護(hù)劑（如適用）。

4.2樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后的保存條件和期限等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫、凍融次數(shù)的要求。

5.【檢驗(yàn)方法】

應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

5.1試驗(yàn)準(zhǔn)備：檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項(xiàng)。

5.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

5.3高濃度樣本的稀釋方法及注意事項(xiàng)，應(yīng)注明經(jīng)過(guò)確認(rèn)的稀釋步驟。

5.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間等以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。

5.5校準(zhǔn)程序（如適用）：校準(zhǔn)品的準(zhǔn)備和使用，校準(zhǔn)曲線的繪制方法。

5.6質(zhì)量控制程序：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

5.7試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算或讀?。涸敿?xì)描述對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判定或計(jì)算方法、對(duì)質(zhì)控品（陰/陽(yáng)性對(duì)照品）的檢測(cè)結(jié)果要求（試驗(yàn)有效性的判斷）等。

6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說(shuō)明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；明確對(duì)于可疑區(qū)間或灰區(qū)樣本是否需要進(jìn)行重復(fù)測(cè)試，如需要，測(cè)試樣本是否為同一個(gè)樣本，或者重新采集新鮮樣本。

7.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說(shuō)明，申請(qǐng)人選擇適用的條款在產(chǎn)品說(shuō)明書中予以闡述。

7.1本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者性別、年齡、病史及其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)等信息綜合考慮。當(dāng)檢驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析查找原因并重新確認(rèn)等。

7.2健康人群（包括孕婦、老年人等）或感染性疾病、肝臟疾病、腫瘤性疾病等多種疾病患者可能出現(xiàn)ANA抗體低滴度弱陽(yáng)性的情況。

7.3一些自身抗體陽(yáng)性的患者可能并未出現(xiàn)臨床癥狀。

7.4陰性結(jié)果并不能排除自身免疫性疾病的可能。

7.5 ANA相關(guān)抗體缺失，針對(duì)高度可溶性抗原的自身抗體（如抗SSA抗體）、針對(duì)含量極少的胞質(zhì)靶抗原（如抗Jo-1抗體）等情況，甚至可能存在系統(tǒng)性自身免疫病患者IIF-ANA檢測(cè)結(jié)果陰性，而針對(duì)靶抗原的特異性自身抗體檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性的情況。

7.6有關(guān)假陽(yáng)性結(jié)果的可能性原因分析，如某些含普魯卡因酰胺或肼苯噠嗪的藥物；或假陰性結(jié)果，如鉤狀效應(yīng)，或由于多種抗體同時(shí)存在時(shí)，核免疫熒光染色模式的掩蓋效應(yīng)。

7.7其他可能存在的問(wèn)題。

8.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對(duì)同一份樣本進(jìn)行檢測(cè)可能會(huì)得到不同的測(cè)試結(jié)果，因此，用不同試劑檢測(cè)所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋，建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測(cè)報(bào)告中注明所用試劑特征。

8.2對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待，提示操作者采取必要的防護(hù)措施。

三、審查關(guān)注點(diǎn)

（一）產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗(yàn)方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；產(chǎn)品技術(shù)要求的格式是否符合《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的相關(guān)規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說(shuō)明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號(hào)）中對(duì)說(shuō)明書的要求。

（三）分析性能評(píng)估指標(biāo)及結(jié)果是否滿足本指導(dǎo)原則中各指標(biāo)驗(yàn)證的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)是否符合統(tǒng)計(jì)學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說(shuō)明書聲稱一致。

（五）試劑盒的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說(shuō)明書聲稱的一致。

四、編制單位

浙江省醫(yī)療器械審評(píng)中心。