丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年第8號）

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丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑注冊
技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine aminotransferase，ALT）測定試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特征對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員適用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)、國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑用于體外定量測定人血清或血漿中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性。本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的測定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性的測定方法目前主要為丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下，L-丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應(yīng)生成乳酸和NAD+。NADH在特定波長（如：340nm處）有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在此波長處測定NADH吸光度下降的速率，即可計算出ALT活性。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則適用于采用丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶催化L-丙酮酸和α-酮戊二酸之間的氨基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，通過在特定波長處吸光度的變化，計算丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學(xué)實驗室進行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶定量測定所使用的臨床化學(xué)體外診斷試劑。本指導(dǎo)原則不適用于干式丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑以及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶同工酶試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑屬于酶類檢測試劑，管理類別為二類，分類代碼為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性評價、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途及相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況

（1）丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法（應(yīng)注明是否添加了磷酸吡哆醛），主要生產(chǎn)工藝過程，校準(zhǔn)品（質(zhì)控品）的制備方法及溯源（定值）情況。

3.有關(guān)生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，人源性材料須對有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關(guān)的證明文件。其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說明文件，為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品等的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定的方法及研究資料；校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：配制、分裝等描述及確定依據(jù)，應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點；反應(yīng)體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應(yīng)條件（溫度、時間等）等研究資料。不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)當(dāng)提交產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應(yīng)包括具體的研究項目、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等詳細(xì)資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品、臨床樣本來源等。

性能評估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、精密度、線性區(qū)間、分析靈敏度、分析特異性、其他影響檢測的因素等。

1.準(zhǔn)確度

對測量準(zhǔn)確度的評價包括：與國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（和/或國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）的偏差分析、方法學(xué)比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

1.1與國家（國際）參考物質(zhì)的比對研究

使用國家參考物質(zhì)或國際參考物質(zhì)作為樣本進行測試，重復(fù)測定3次，計算平均值與標(biāo)示值的相對偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清對試劑盒進行測試，每個濃度樣本重復(fù)測定3次，分別取測試結(jié)果均值，計算相對偏差。

1.2回收試驗

在人血清樣品中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)或校準(zhǔn)品溶液，每個濃度重復(fù)測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

1.2.1加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液體積與血清體積比應(yīng)不大于1:20或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化。

1.2.2加入標(biāo)準(zhǔn)溶液或校準(zhǔn)品溶液后樣品總濃度應(yīng)在試劑（盒）測定線性范圍內(nèi)。

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液或校準(zhǔn)品應(yīng)有溯源性。

1.3比對試驗

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

2.精密度

2.1批內(nèi)精密度

測量精密度的評估應(yīng)至少包括高、低兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值附近和異常高值樣本。批內(nèi)精密度應(yīng)不大于5.0%。

2.2批間精密度

用一份樣本分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，測定均值。按相對極差（R）＝（xmax-xmin）/t×100% 公式計算。相對極差應(yīng)不大于10.0%。

3.線性區(qū)間

建立試劑線性區(qū)間所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。

以接近線性范圍上限的高濃度（活性）樣品和接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣品，混合成至少5個稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程，并計算線性相關(guān)系數(shù)（r）。線性范圍上限至少達500U/L, 線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。

4.分析靈敏度

4.1速率法

用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位濃度吸光度變化率差值或吸光度變化，應(yīng)符合企業(yè)給定區(qū)間。

4.2終點法

稀釋一定濃度樣品（n單位被測物），測定吸光度，計算吸光度值與空白吸光度值有差別的樣品濃度應(yīng)符合企業(yè)給定區(qū)間。

5.分析特異性

對樣本中常見的干擾物質(zhì)進行檢測，如膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等。方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

6.校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值

校準(zhǔn)品、質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源SOP文件等。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

7.其他需注意問題

應(yīng)當(dāng)對多批產(chǎn)品進行性能評估，對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細(xì)的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標(biāo)準(zhǔn)，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應(yīng)低于120例。

若引用針對中國人群參考值范圍研究的相關(guān)文獻，應(yīng)明確說明出處，并進行驗證。參考值研究結(jié)論應(yīng)與說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等，申請人應(yīng)至少提供3個生產(chǎn)批次的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等，研究應(yīng)涵蓋產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)，申請人應(yīng)至少能提供在實際儲存條件下超過聲稱有效期的除裝量和批間差外的評價資料。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究（例如：校準(zhǔn)品穩(wěn)定性應(yīng)選取最易受影響的最小裝量，干粉劑型應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料），實時穩(wěn)定性研究的時間間隔應(yīng)不大于3個月。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限若有相關(guān)文獻中已明確說明，亦可作為依據(jù)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細(xì)說明。

（七）臨床評價資料

臨床評價資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。根據(jù)《關(guān)于發(fā)布第三批免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第170號），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑可免于進行臨床試驗，申請人可依照《總局關(guān)于發(fā)布免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）開展評價。申請人如無法按要求對“目錄”中產(chǎn)品進行臨床評價，應(yīng)進行臨床試驗。

下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于擬申報產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床研究單位的選擇

應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和對照試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預(yù)試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室承擔(dān)本實驗的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機構(gòu)選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。

4.研究對象選擇

臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應(yīng)不低于試驗總量的30%。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

應(yīng)明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。

如果待評試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究，同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結(jié)果間的一致性（采用待評試劑檢測），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進行試驗，異常值參照上述規(guī)定。

涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于30%。變更主要原材料的供應(yīng)商（新增加）、參考區(qū)間及增加臨床適應(yīng)證等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

5.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關(guān)分析、線性回歸、一致性分析、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。若涉及脫落樣本應(yīng)明確原因。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

6.1臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

6.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

6.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

6.2具體的臨床試驗情況

6.2.1待評價試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

6.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2.3質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。

6.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

6.3統(tǒng)計學(xué)分析

6.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

6.3.2 定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。

建議給出待評試劑與參比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）及比值（相對偏倚/偏差），并符合相應(yīng)的要求。

6.4討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計開發(fā)、原材料的采購控制、生產(chǎn)、預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析、風(fēng)險評價和相應(yīng)的風(fēng)險控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險管理報告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

風(fēng)險分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：

預(yù)期用途錯誤包括：設(shè)計開始時未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設(shè)計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組分、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)注冊申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗方法。

下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和主要性能指標(biāo)等相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)

（1）GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》

（2）GB/T 29791.1—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標(biāo)示 第1部分：術(shù)語定義和通用要求》

（3）GB/T 29791.2—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標(biāo)示 第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑》

（4）GB/T 26124—2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》

（5）YY/T 0638—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)物中酶催化濃度賦值的計量學(xué)溯源性》

（6）YY/T 1197—2013《丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒（IFCC法）》

（7）WS/T 404.1—2012《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和γ-谷氨?；D(zhuǎn)移酶》

2.主要性能指標(biāo)

2.1外觀

符合制造商規(guī)定的正常外觀要求。

2.2裝量

液體試劑的裝量應(yīng)不少于標(biāo)示量。

2.3試劑空白

2.3.1空白吸光度

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度應(yīng)不小于1.0（340nm，1cm）。

2.3.2空白吸光度變化率（終點法不適用）

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度變化率△A/min（37℃，340nm，1cm）應(yīng)不大于0.004。

2.4分析靈敏度

2.4.1速率法：用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位濃度吸光度變化率差值或吸光度變化應(yīng)符合制造商給定區(qū)間。

2.4.2終點法：稀釋一定濃度（n單位）的樣品（檢測限樣品），測定吸光度，計算吸光度值能夠與空白吸光度區(qū)分的樣品濃度應(yīng)符合制造商給定區(qū)間。

2.5線性區(qū)間

線性區(qū)間上限至少達到500 U/L。

2.5.1相關(guān)系數(shù)（r）

線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。

2.5.2線性偏差

線性偏差應(yīng)不超過申請人給定值。線性偏差應(yīng)分段描述，并注意分段點的選擇。

2.6精密度

2.6.1批內(nèi)精密度

測量精密度的評估應(yīng)至少包括高、低兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的正常參考值附近和異常高值樣本。批內(nèi)精密度應(yīng)不大于5.0%。

2.6.2批間精密度

用一份質(zhì)控品分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，測定均值。相對極差應(yīng)不大于10.0%。

2.7準(zhǔn)確度

2.7.1相對偏差 提供參考物質(zhì)或用參考方法定值的血清測定，實測值與標(biāo)示值偏差應(yīng)在±15.0%范圍內(nèi)。

2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)溶液體積與臨床樣本體積應(yīng)不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后樣品總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi)），回收率應(yīng)在90%—110%之間。

2.7.3比對試驗 用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內(nèi)上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內(nèi)的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r≥0.990以及每個濃度點的偏差，偏差應(yīng)不超過申請人給定值。偏差應(yīng)分段描述，并注意分段點的確定。

建議按上述優(yōu)先順序，采用上述方法之一測試試劑盒的準(zhǔn)確度。

2.8穩(wěn)定性

檢測申請人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、精密度、準(zhǔn)確度要求。凍干品應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、測量精密度、準(zhǔn)確度要求。

2.9校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準(zhǔn)確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。

（十）注冊檢驗報告

具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)出具的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶項目若有相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布或者更新的，應(yīng)提供產(chǎn)品能夠符合國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品要求的檢驗報告。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒說明書的重點內(nèi)容進行詳細(xì)說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定試劑盒（丙氨酸底物法）。通用名稱應(yīng)當(dāng)按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》規(guī)定的命名原則進行命名，可適當(dāng)參考相關(guān)“分類目錄”和/或國家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進行表述。包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙或其他多試劑類型。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1說明試劑盒用于體外定量測定血清/血漿中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的活性；同時應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)證背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。

3.2丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶主要用于輔助評價肝功能。ALT是反映肝損傷的靈敏指標(biāo)，各種急性肝損傷（如急性傳染性肝炎及藥物或酒精中毒）時，血清ALT可在臨床癥狀（如黃疸）出現(xiàn)之前急劇升高等，并一般與病情輕重和恢復(fù)情況相平行；慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝淤血等血清ALT也可升高。另外，膽囊炎、膽石癥、胰腺炎、心肌梗死及服用某些藥物（如氯丙嗪、奎寧、水楊酸制劑等）時可見血清ALT升高。

作為支持性資料，申請人應(yīng)提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關(guān)臨床適應(yīng)證背景的資料。

4.【檢驗原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢測原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進行描述：

如：在ALT的催化下，丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應(yīng)生成乳酸和NAD-。NADH在波長340nm有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在340nm處測定NADH吸光度下降的速率，即可計算出ALT活性。

5.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，除明確組成成分及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。

例如：

本試劑盒由試劑1、試劑2和校準(zhǔn)品（選購）組成：

試劑1：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100mmol/L，L-丙氨酸500 mmol/L，乳酸脫氫酶 1700U/L

試劑2：α-酮戊二酸15mmol/L，NADH 0.18mmol/L

校準(zhǔn)品：含有丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的溶液，校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國家參考物質(zhì)或國際參考物質(zhì)。

6.【儲存條件及有效期】

應(yīng)明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后的待機穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫” “室溫”。

7.【適用儀器】

應(yīng)明確可適用的具體品牌、型號的生化分析儀器。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運輸條件，對已知干擾物的抗干擾性（如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度）等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求（如：草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。

9.【檢驗方法】

詳細(xì)說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項、校準(zhǔn)曲線的繪制。

9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、質(zhì)量控制方法。

9.5試驗結(jié)果的計算或讀?。簯?yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并說明參考值確定方法。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

說明可能對檢驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進行確認(rèn)試驗。

12.【檢驗方法的局限性】

說明該檢驗方法的局限性。當(dāng)測定值超出線性上限時，應(yīng)說明使用廠家提供的專用稀釋液或明確稀釋方法，并給出稀釋最大倍數(shù)說明。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)：

13.1試劑空白。

13.2分析靈敏度。

13.3準(zhǔn)確度。

13.4精密度（批內(nèi)精密度和批間精密度）。

13.5線性區(qū)間（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學(xué)解釋。

14.4有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.5對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.6其他有關(guān)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定的注意事項。

15.【標(biāo)識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】

注明引用參考文獻，其書寫應(yīng)清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑

按照以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號

19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】

應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點

（一）產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標(biāo)的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求；技術(shù)要求的格式是否符合《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。應(yīng)注明是否添加了磷酸吡哆醛。

（三）分析性能評估指標(biāo)及結(jié)果是否支持產(chǎn)品技術(shù)要求的確定；是否滿足本指導(dǎo)原則中各指標(biāo)驗證的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（五）試劑的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（六）臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（七）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

四、編寫單位

浙江省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心。