堿性磷酸酶測定試劑盒注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2016年修訂版）（2016年第28號）

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堿性磷酸酶測定試劑盒注冊
技術(shù)審查指導(dǎo)原則
（2016年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對堿性磷酸酶測定試劑盒注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門審評注冊申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對堿性磷酸酶測定試劑盒的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

堿性磷酸酶測定試劑盒是指基于分光光度法原理對人血清、血漿或其他體液中的堿性磷酸酶活性進(jìn)行體外定量測定的試劑。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

堿性磷酸酶活性的測定方法目前主要有連續(xù)監(jiān)測法和比色法兩類：

1.連續(xù)監(jiān)測法（磷酸對硝基苯酚底物法）

堿性磷酸酶催化水解磷酸對硝基苯酚（4-NPP），生成對硝基苯酚（4-NP），在特定波長處監(jiān)測吸光度變化速率，可計(jì)算堿性磷酸酶活性。

2.比色法（磷酸苯二鈉底物法）

堿性磷酸酶催化水解磷酸苯二鈉，生成游離酚，酚與4-氨基安替比林結(jié)合，經(jīng)鐵氰化鉀氧化生成紅色的醌衍生物，在特定波長處監(jiān)測吸光度值，可計(jì)算堿性磷酸酶活性。

從方法學(xué)考慮，本文主要指以堿性磷酸酶水解底物引起特定產(chǎn)物的吸光度的改變對堿性磷酸酶活性進(jìn)行定量測定的體外診斷試劑，不包括干化學(xué)和酶聯(lián)免疫檢測試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），堿性磷酸酶檢測試劑屬于酶類檢測試劑，管理類別為Ⅱ類，分類代號為6840。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價(jià)、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途：描述產(chǎn)品的預(yù)期用途，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，如臨床適應(yīng)癥的發(fā)生率、易感人群等，相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程及關(guān)鍵控制點(diǎn)，校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的制備方法以及校準(zhǔn)品溯源和質(zhì)控品定值情況。

3.有關(guān)生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動(dòng)物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，為保證產(chǎn)品在運(yùn)輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，研究者應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗(yàn)方法予以說明，并提供相關(guān)的證明文件。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

主要原材料的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)確定的方法及研究資料；校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點(diǎn)、確定反應(yīng)溫度、時(shí)間、緩沖體系比較等條件的研究資料、確定樣本和試劑盒組分加樣量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法的研究資料。

ALP緩沖液通常分為三類：1.惰性型：如碳酸鹽緩沖液和巴比妥緩沖液；2.抑制型：如甘氨酸緩沖液；3.激活型：如AMP、Tris和DEA緩沖液。激活型緩沖液，緩沖物質(zhì)作為酶的一種底物（磷酸?；氖荏w），參與磷酸?；囊茡Q反應(yīng)，因此能促進(jìn)酶促反應(yīng)速率。使用最適濃度和激活型緩沖液時(shí)，所測的ALP活性要比使用惰性型緩沖液（如碳酸鹽緩沖液）時(shí)高2—6倍。DEA的激活作用比AMP的激活作用更強(qiáng)，因此，用不同緩沖液測定ALP活性時(shí)，其參考值不同。

ALP活性與血清在反應(yīng)液中所占的體積百分?jǐn)?shù)有關(guān)。當(dāng)血清體積分?jǐn)?shù)從1/26降低到1/51時(shí)，測出的酶活性隨之增高；但低于1/51時(shí)，酶活性沒有進(jìn)一步增加。

（四）分析性能評估資料

應(yīng)至少包括具體的研究方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法、研究結(jié)論等。性能評估時(shí)應(yīng)將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評價(jià)，評估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。

性能評估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、最低檢測限、分析特異性（抗干擾能力）、其他影響檢測的因素等。

1.準(zhǔn)確度

可采用相對偏差和方法學(xué)比對之一測定試劑盒的準(zhǔn)確度，優(yōu)先采用相對偏差的方法。

1.1相對偏差

使用申報(bào)試劑盒檢測有證參考物質(zhì)（CRM）計(jì)算相對偏差。

也可用由參考測量程序定制的參考區(qū)間上限和參考區(qū)間上限2至5倍濃度水平各一個(gè)人源樣本（可適當(dāng)添加被測物，以獲得高濃度的樣本），按照上述方法對試劑盒準(zhǔn)確度進(jìn)行測試。

1.2方法學(xué)比對

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標(biāo)本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報(bào)試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實(shí)施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報(bào)試劑和參比試劑進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗(yàn)。方法學(xué)比對時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。其中，樣本濃度應(yīng)在方法的線性范圍內(nèi)，并覆蓋醫(yī)學(xué)決定水平。

2.精密度

測量精密度的評估建議包括兩個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個(gè)濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標(biāo)的臨界值附近樣本和異常高值樣本。

3.線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測定，應(yīng)作相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時(shí)應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。

4.最低檢測限

最低檢測限的確定常使用同批號試劑對零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20次重復(fù)檢測，平均值加2倍SD（≥95%置信區(qū)間）即試劑的最低檢測限。

5.分析特異性

應(yīng)明確已知干擾因素對測定結(jié)果的影響：可采用回收實(shí)驗(yàn)對不同濃度的溶血（血紅蛋白）、黃疸（膽紅素）、脂血（甘油三酯）對檢測結(jié)果的影響進(jìn)行評價(jià)，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。待評價(jià)的堿性磷酸酶樣本濃度至少應(yīng)為高、中、低三個(gè)水平，選取線性范圍內(nèi)有臨床代表性意義的濃度。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。

6.校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值

校準(zhǔn)品應(yīng)提供詳細(xì)的量值溯源資料，包括定值試驗(yàn)資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細(xì)的定值記錄。應(yīng)參照GB/T 21415-2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度計(jì)算記錄，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

7.其他需注意問題

不同適用機(jī)型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報(bào)告；適用機(jī)型必須明確具體型號，不能寫系列；如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)明確研究采用的樣本來源、詳細(xì)的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計(jì)方法等，參考值范圍可參考文獻(xiàn)資料，但應(yīng)當(dāng)進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證樣本數(shù)量應(yīng)不低于120例。不同性別和年齡段，堿性磷酸酶參考范圍差異較大，申請人應(yīng)分別進(jìn)行研究，驗(yàn)證樣本例數(shù)應(yīng)分別達(dá)到上述要求。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶（待機(jī)）穩(wěn)定性等，申請人應(yīng)至少提供3個(gè)生產(chǎn)批次的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運(yùn)輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等，研究應(yīng)涵蓋產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)，申請人應(yīng)至少能提供穩(wěn)定性末期的除裝量和批間差外的評價(jià)資料。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進(jìn)行研究（例如：校準(zhǔn)品穩(wěn)定性應(yīng)選取最易受影響的最小裝量），實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究的時(shí)間間隔應(yīng)不大于3個(gè)月。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定時(shí)間段即對儲存樣本進(jìn)行性能分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)資料

臨床試驗(yàn)資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）要求，同時(shí)研究資料的形式應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關(guān)的規(guī)定。下面僅對臨床試驗(yàn)中的基本問題進(jìn)行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于試驗(yàn)用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進(jìn)行對比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

應(yīng)選擇至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，臨床試驗(yàn)工作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，待評試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗(yàn)方案必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。

4.研究對象選擇

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，建議對各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于80例。

如果待評試劑聲稱同時(shí)適用于多個(gè)樣本類型，應(yīng)完成一個(gè)樣本類型不少于200例的臨床研究，其余樣本類型的研究可選100例樣本，異常值樣本不少于40例進(jìn)行臨床研究，其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。也可以分別對同時(shí)適用的多個(gè)樣本類型按照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》中試驗(yàn)樣本量一般要求規(guī)定的200例進(jìn)行試驗(yàn)，異常值參照上述規(guī)定。

涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項(xiàng)，臨床試驗(yàn)采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對試驗(yàn)，在至少2家（含2家）臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于40例。

樣本應(yīng)明確存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿樣本應(yīng)明確抗凝劑的要求。實(shí)驗(yàn)中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時(shí)，注明貯存條件及時(shí)間，在數(shù)據(jù)分析時(shí)應(yīng)考慮其影響。

樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。對于對比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評價(jià)待評試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

（1）臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

①臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

②納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

③樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

④統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

（2）具體的臨床試驗(yàn)情況

①待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機(jī)型等信息；

②對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

③質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。

④具體試驗(yàn)過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

（3）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

①數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

②定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。

（4）討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié),從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析、風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)和相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險(xiǎn)管理報(bào)告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

風(fēng)險(xiǎn)分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：預(yù)期用途錯(cuò)誤包括：設(shè)計(jì)開始時(shí)未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機(jī)型驗(yàn)證、未針對特定的樣本類型驗(yàn)證。性能特征失效包括：精密度失效、準(zhǔn)確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準(zhǔn)失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯(cuò)誤、采購的原料未能達(dá)到設(shè)計(jì)要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e(cuò)誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗(yàn)者未按照原料、半成品、成品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作，裝配過程組份、標(biāo)簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運(yùn)輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。

進(jìn)口產(chǎn)品的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)當(dāng)包括英文版和中文版，英文版應(yīng)當(dāng)由申請人簽章，中文版由申請人或其代理人簽章。

1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)：

（1）GB/T 21415-2008 《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》

（2）GB/T 26124-2011 《臨床化學(xué)體外診斷試劑盒》

（3）YY/T 0316-2008 《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》

（4）YY/T 0638-2008 《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)物中酶催化濃度賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》

（5）YY/T 1234-2014 《堿性磷酸酶測定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）》

2.主要性能指標(biāo)：

（1）外觀：

應(yīng)與申請人聲稱試劑外觀一致。這里可以包括試劑盒包裝外觀、試劑內(nèi)包裝外觀、試劑的外觀。

（2）裝量（凍干品不適用）：

試劑裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量。

（3）試劑空白吸光度：

用生理鹽水作為空白加入工作試劑作為樣品測試時(shí)，試劑空白吸光度應(yīng)不大于企業(yè)規(guī)定的要求。

（4）試劑空白吸光度變化率：

用生理鹽水作為空白加入工作試劑作為樣品測試時(shí)，試劑空白吸光度變化率△A/min(37℃，405nm,1cm)≤0.005。

（5）分析靈敏度

按照試劑說明書設(shè)置上機(jī)參數(shù)，用試劑盒測試（120±12）U/L的樣本，記錄在試劑盒規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變，換算為120U/L的吸光度變化率（ΔA/min），應(yīng)符合生產(chǎn)企業(yè)給定范圍。

（6）線性范圍

用達(dá)到線性范圍上限活性的樣品和達(dá)到線性范圍下限活性的樣品，混合成至少5個(gè)稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個(gè)稀釋濃度測試3次，分別求出測定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計(jì)算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。

稀釋濃度（xi）代入求出線性回歸方程，計(jì)算yi的估計(jì)值及yi與估計(jì)值的相對偏差或絕對偏差。

線性范圍應(yīng)至少達(dá)到但不限于25U/L—750U/L（下限不得高于25U/L，上限不得低于750U/L）。

①相關(guān)系數(shù)（r）

線性相關(guān)系數(shù)︱r︱應(yīng)不小于0.990。

（線性范圍下限應(yīng)不低于產(chǎn)品的最低檢測限，不高于參考范圍下限）

②[25，100]U/L范圍內(nèi)，線性絕對偏差應(yīng)不超過±10U/L；[100，750] U/L范圍內(nèi)，線性相對偏差應(yīng)不超過±10%。

（7）測量精密度

①批內(nèi)重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，用試劑盒測試（120±12）U/L的樣本或質(zhì)控樣品，重復(fù)測試至少10次（n≥10），分別計(jì)算測量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s）。計(jì)算變異系數(shù)（CV）,應(yīng)不大于5%。

②批內(nèi)瓶間差（干粉或凍干試劑）

用(120±12) U/L的樣本或質(zhì)控樣品測試同一批號的10個(gè)待檢試劑盒，并計(jì)算10個(gè)測量值的平均值（1）和標(biāo)準(zhǔn)差（s1）。

用(120±12) U/L的樣本或質(zhì)控樣品對該批號的1個(gè)待檢試劑盒重復(fù)測試10次，計(jì)算結(jié)果的均值（2）和標(biāo)準(zhǔn)差（s2）。按公式（2）、（3）計(jì)算瓶間差的變異系數(shù)（CV）。

當(dāng)s1＜s2時(shí)，令CV=0

每個(gè)濃度下試劑盒批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5%。

③批間差

用(120±12) U/L的樣本或質(zhì)控樣品分別測試3個(gè)不同批號的試劑盒，每個(gè)批號測試3次，分別計(jì)算每批3次測定的均值(i=1,2,3)，按公式（4）、（5）計(jì)算相對極差（R）。

式中：

試劑盒批間差相對極差應(yīng)不大于10%。

（8）準(zhǔn)確度

①相對偏差：

試劑盒測試可用于評價(jià)常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）3次，測試結(jié)果記為（xi）,按式（6）分別計(jì)算相對偏差（Bi），3次結(jié)果相對偏差均應(yīng)不超過±10%，1次不符合要求時(shí)，應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照式（6）計(jì)算相對偏差（Bi），當(dāng)大于等于19次結(jié)果的相對偏差不超過±10%，視為符合要求。

式中：

xi—測試結(jié)果；

T—有證參考物質(zhì)標(biāo)示值，或各濃度人源樣品定值。

也可用由參考測量程序定制的參考區(qū)間上線和參考區(qū)間上限2至5倍濃度水平各一個(gè)人源樣本（可適當(dāng)添加被測物，以獲得高濃度的樣本），按照上述方法對試劑盒準(zhǔn)確度進(jìn)行測試。

②比對試驗(yàn)：

用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內(nèi)上市）分別檢測不少于40個(gè)在檢測范圍內(nèi)的人源樣品，用線性回歸方法計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)r2≥0.95, [25，100]U/L范圍內(nèi)，偏差應(yīng)不超過±10U/L；(100，750] U/L范圍內(nèi)，偏差不超過±10%。

（9）穩(wěn)定性

檢測已到期試劑或取有效期內(nèi)樣品根據(jù)生產(chǎn)企業(yè)聲稱的熱穩(wěn)定性條件下放置，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率、分析靈敏度、線性、測量精密度、準(zhǔn)確度要求。

凍干品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗(yàn)，復(fù)溶后放置到有效期末，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率、分析靈敏度、線性、測量精密度、準(zhǔn)確度要求。

（10）校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準(zhǔn)確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。

（十）注冊檢驗(yàn)報(bào)告

具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的注冊檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價(jià)意見。

堿性磷酸酶產(chǎn)品目前尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品，如果申報(bào)試劑今后有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出相應(yīng)檢測要求。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)方法、對檢驗(yàn)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。

結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對堿性磷酸酶測定試劑盒說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

（1）根據(jù)《辦法》中的命名原則，產(chǎn)品名稱通常由被測物質(zhì)的名稱、用途、方法或原理三部分組成，方法或原理部分應(yīng)能體現(xiàn)具體反應(yīng)原理，建議參考分類目錄或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。例如：堿性磷酸酶測定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）。

（2）英文名稱應(yīng)當(dāng)正確、完整、直譯，不宜只寫縮寫。

2.【包裝規(guī)格】

包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙或其他多試劑類型；如不同包裝規(guī)格有與之特定對應(yīng)的機(jī)型，則應(yīng)同時(shí)明確適用機(jī)型。如有貨號，可增加貨號信息。

如：試劑1:1×60mL,試劑2: 1×15mL  日立7170生化分析儀

3.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1說明試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿和/或其他體液中堿性磷酸酶的活性；同時(shí)應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況。

3.2堿性磷酸酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

如：堿性磷酸酶主要用于阻塞性黃疸、肝膽疾病、骨組織疾病等的檢查。生理性增高：兒童在生理性的骨骼發(fā)育期，堿性磷酸酶活力可比正常人高1—2倍；病理性升高：(1)骨骼疾病如佝僂病、軟骨病等；(2)肝膽疾病如肝外膽道阻塞、肝硬化、毛細(xì)膽管性肝炎等；(3)其他疾病如甲狀旁腺機(jī)能亢進(jìn)。病理性降低：見于重癥慢性腎炎、兒童甲狀腺機(jī)能不全、貧血等。

作為支持性資料，申請人應(yīng)提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻(xiàn)或英文SCI文獻(xiàn)等有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景的資料。

4.【檢驗(yàn)原理】應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗(yàn)的原理、方法，必要時(shí)可采取圖示方法表示，檢測原理的描述應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關(guān)系進(jìn)行描述：

如：本產(chǎn)品以磷酸對硝基苯酚（4-NPP）為底物，2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP）為磷酸?；荏w物質(zhì)，增進(jìn)酶反應(yīng)速率，在堿性磷酸酶（ALP）催化下，4-NPP分裂出磷酸基團(tuán)，生成游離的對硝基苯酚（4-NP），后者在堿性溶液中轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)較深的黃色。反應(yīng)式如下：

由于反應(yīng)中4-NP的生成速率與ALP活性呈正比，因此在37℃、405nm波長下監(jiān)測吸光度上升速率，可得出ALP的活性。

5.【主要組成成分】應(yīng)明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，除明確組成成份及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。

例如：

本試劑盒由試劑1、試劑2和校準(zhǔn)品組成：

試劑1：AMP 1.0 mmol/L，硫酸鋅 1.5 mmol/L，醋酸鎂 2.5 mmol/L，N-羥乙基乙二胺三乙酸（HEDTA） 2.5mmol/L。

試劑2：磷酸-4-硝基苯酚 100 mmol/L，氯化鎂10.5 mmol/L。

校準(zhǔn)品：含有堿性磷酸酶的人源血清基質(zhì)，校準(zhǔn)品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標(biāo)示，量值可溯源至國際參考物質(zhì)JCCLS CRM001b。

6.【儲存條件及有效期】應(yīng)明確未開封的試劑實(shí)際儲存條件及有效期，開封后的待機(jī)穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”。

7.【適用儀器】應(yīng)明確可適用的具體品牌、型號的生化分析儀器。

8.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運(yùn)輸條件等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求（如草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對堿性磷酸酶活性造成干擾，應(yīng)明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，可凍融次數(shù)。特殊體液標(biāo)本還應(yīng)詳細(xì)描述對采集條件、保存液、容器要求等可能影響檢測結(jié)果的要求。應(yīng)對已知的干擾物進(jìn)行說明，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等干擾物對測定的影響，同時(shí)列出干擾物的具體濃度。

9.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

9.2試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時(shí)間等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)。

9.3校準(zhǔn)程序：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。

9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報(bào)告。

9.5檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算或讀?。簯?yīng)明確檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算方法。超出線性范圍的樣本如進(jìn)行稀釋，應(yīng)結(jié)合可報(bào)告范圍研究結(jié)果明確稀釋液類型和最大可稀釋比例。

10.【參考區(qū)間】應(yīng)注明常用樣本類型的參考區(qū)間，并簡要說明其確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考范圍”。

11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】說明可能對檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。檢驗(yàn)結(jié)果的判定方法應(yīng)在【檢驗(yàn)方法】中明確。

12.【檢驗(yàn)方法的局限性】說明該檢驗(yàn)方法的局限性。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)，性能指標(biāo)應(yīng)不低于標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)技術(shù)指標(biāo)的要求。

13.1試劑空白吸光度及試劑空白吸光度變化率；

13.2分析靈敏度；

13.3準(zhǔn)確度；

13.4精密度（重復(fù)性和批間差）；

13.5線性范圍（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學(xué)成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學(xué)的試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報(bào)告注明所用試劑特征。

14.4有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.5樣本：（1）采集時(shí)間要求、與用藥的先后順序或用藥后時(shí)間間隔等；（2）對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

14.6其他有關(guān)堿性磷酸酶測定的注意事項(xiàng)。

15.【標(biāo)識的解釋】如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻(xiàn)】應(yīng)當(dāng)注明在編制說明書時(shí)所引用的參考文獻(xiàn)。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的按以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進(jìn)口體外診斷試劑

按照以下格式標(biāo)注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19.【說明書核準(zhǔn)日期及修改日期】應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時(shí)注明說明書的修改日期。

三、參考文獻(xiàn)：

（一）《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）

（二）《醫(yī)療器械說明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）

（三）《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）

（四）《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）

（五）《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）

（六）《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）

（七）《關(guān)于含有牛、羊源性材料醫(yī)療器械注冊有關(guān)事宜的公告》（國食藥監(jiān)械〔2006〕407號）

（八）國家食品藥品監(jiān)督管理部門發(fā)布的其他規(guī)范性文件

（九）GB/T 21415-2008 體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性

（十）GB/T 26124-2011臨床化學(xué)體外診斷試劑盒

（十一）YY/T 0316-2008 醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用

（十二）YY/T 0638-2008 體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)物中酶催化濃度賦值的計(jì)量學(xué)溯源性

（十三）YY/T 1227-2014臨床化學(xué)體外診斷試劑盒命名

（十四）YY/T 1234-2014堿性磷酸酶測定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）

堿性磷酸酶測定試劑盒注冊
技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2016年修訂版）編制說明

一、指導(dǎo)原則編制目的

編制本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)和規(guī)范注冊申請人對堿性磷酸酶測定試劑盒注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫工作，同時(shí)幫助審查人員理解和掌握該類產(chǎn)品原理、組成、性能、預(yù)期用途等內(nèi)容，把握技術(shù)審評工作基本要求和尺度，對產(chǎn)品安全性、有效性作出系統(tǒng)評價(jià)。

由于堿性磷酸酶測定試劑盒產(chǎn)品仍在不斷發(fā)展，審查人員仍需從風(fēng)險(xiǎn)分析的角度認(rèn)真確定申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途與風(fēng)險(xiǎn)管理是否相當(dāng)；由于我國醫(yī)療器械法規(guī)框架仍在構(gòu)建中，審查人員仍需密切關(guān)注相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)及最新進(jìn)展，關(guān)注審評產(chǎn)品實(shí)際組成、原理、預(yù)期用途等方面的個(gè)性特征，以保證產(chǎn)品審評符合現(xiàn)行法規(guī)安全、有效的要求。

本次修訂主要依據(jù)新法規(guī)和新行標(biāo)，對注冊申報(bào)資料的要求和順序進(jìn)行調(diào)整。同時(shí)結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)，對技術(shù)審評過程中的常見問題和相關(guān)要求在修訂后的指導(dǎo)原則中予以明確。

二、指導(dǎo)原則編制重點(diǎn)內(nèi)容說明

（一）本指導(dǎo)原則根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式》的相關(guān)要求，借鑒國家食品藥品監(jiān)督管理部門已發(fā)布的相關(guān)產(chǎn)品注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則的體例進(jìn)行修訂。

（二）在產(chǎn)品綜述資料中，全面介紹了堿性磷酸酶產(chǎn)品的預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評價(jià)、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容。

（三）本指導(dǎo)原則不涉及產(chǎn)品作用機(jī)理的內(nèi)容，主要描述相應(yīng)的診斷方法和原理。

（四）產(chǎn)品應(yīng)適用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中給出了現(xiàn)行有效的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，本次修訂刪除部分國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，保留了與產(chǎn)品密切相關(guān)的參考標(biāo)準(zhǔn)。

（五）產(chǎn)品的主要性能指標(biāo)中給出了產(chǎn)品需要考慮的各個(gè)方面，主要提出共性要求，具體量化指標(biāo)需要參照相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和生產(chǎn)商技術(shù)能力予以確定。

（六）本次修訂依據(jù)YY/T 1234-2014《堿性磷酸酶測定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）》對分析性能評估和產(chǎn)品技術(shù)要求中準(zhǔn)確度“相對偏差”的試驗(yàn)方法進(jìn)行了修訂。

（七）考慮到已上市產(chǎn)品尚無金標(biāo)類檢測試劑，適用范圍排除的方法學(xué)中，刪除了金標(biāo)類檢測試劑。

（八）依據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求，將【檢驗(yàn)方法】中“校準(zhǔn)”“質(zhì)量控制”的描述修訂為“校準(zhǔn)程序”、“質(zhì)量控制程序”，將【參考值（范圍）】的描述修訂為【參考區(qū)間】、增加了【標(biāo)識的解釋】欄目、將【生產(chǎn)企業(yè)】修訂為【基本信息】、刪除了【產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號】修訂為【產(chǎn)品技術(shù)要求編號】。【樣本要求】中明確了干擾物的種類，而干擾物對試劑盒檢測結(jié)果造成的影響及干擾物的具體濃度在【檢驗(yàn)方法的局限性】中予以具體描述?？紤]到申請人可能會對【檢驗(yàn)方法的解釋】欄目應(yīng)明確的內(nèi)容造成誤解，說明書【檢驗(yàn)方法的解釋】增加了提示：“檢驗(yàn)結(jié)果的判定方法應(yīng)在【檢驗(yàn)方法】中明確”。我們曾考慮將分析性能評估的結(jié)果體現(xiàn)在說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)中】，供臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室做參考，為避免日常監(jiān)督檢查中造成誤解，建議相關(guān)指標(biāo)內(nèi)容與產(chǎn)品技術(shù)要求保持一致。企業(yè)也可選擇將分析性能評估結(jié)果寫在該欄目中，但需注明“上述結(jié)果為產(chǎn)品研制中分析性能評估試驗(yàn)結(jié)果，不低于產(chǎn)品技術(shù)要求”。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求：“擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明”修訂為“產(chǎn)品技術(shù)要求”，刪除了GB/T 191-2008、WS/T 351-2011等與產(chǎn)品相關(guān)度不高的標(biāo)準(zhǔn)。分析靈敏度的試驗(yàn)方法參照 YY/T 1234-2014堿性磷酸酶測定試劑盒（NPP底物-AMP緩沖液法）進(jìn)行了修訂，明確了被測物的具體濃度?？紤]到酶類產(chǎn)品的純品較難獲得，且回收試驗(yàn)易受干擾，本指導(dǎo)原則中準(zhǔn)確性研究方法未設(shè)置“回收試驗(yàn)”方法作為準(zhǔn)確度研究的方法。依據(jù)《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》要求，產(chǎn)品技術(shù)要求刪除了型式檢驗(yàn)和出廠檢驗(yàn)要求的描述。

（十）關(guān)于線性偏差以及準(zhǔn)確度偏差說明：考慮到，如技術(shù)要求中線性偏差以及準(zhǔn)確度（比對試驗(yàn)）偏差均采用相對偏差進(jìn)行表述，當(dāng)對線性范圍中某一極低值樣本進(jìn)行線性范圍以及準(zhǔn)確度（比對試驗(yàn)）試驗(yàn)時(shí)，其試驗(yàn)結(jié)果采用絕對偏差符合申請人的規(guī)定更為合理。因此，本指導(dǎo)原則建議企業(yè)可對產(chǎn)品線性偏差以及準(zhǔn)確度（比對試驗(yàn)）偏差進(jìn)行分段要求，分別采用絕對偏差和相對偏差進(jìn)行表述?？紤]到線性相關(guān)系數(shù)的結(jié)果可能為負(fù)值，線性相關(guān)系數(shù)的要求r不小于0.990修訂為︱r︱應(yīng)不小于0.990。

（十一）關(guān)于分析性能中最低檢測限的說明：最低檢測限的研究有助于合理確定產(chǎn)品線性范圍（線性低值），因此，本指導(dǎo)原則在分析性能評估資料中對產(chǎn)品最低檢測限做出要求。

（十二）注冊檢驗(yàn)：考慮到檢測結(jié)果的室間一致性及該項(xiàng)目量值的統(tǒng)一性，在注冊檢驗(yàn)報(bào)告要求中明確了一旦國家參考品/標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測要求。

（十三）經(jīng)與中國食品藥品檢定研究院核實(shí)，堿性磷酸酶尚無國家標(biāo)準(zhǔn)品，刪除了該產(chǎn)品有國家標(biāo)準(zhǔn)品的描述。

（十四）關(guān)于參考區(qū)間的驗(yàn)證資料中對健康個(gè)體至少120例的說明：此例數(shù)的規(guī)定，結(jié)合已發(fā)布產(chǎn)品技術(shù)審查指導(dǎo)原則，并參考WS/T 402-2012《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定》以及C28-A2《如何確定臨床檢驗(yàn)的參考區(qū)間：批準(zhǔn)指南（2000）》。

（十五）關(guān)于產(chǎn)品穩(wěn)定性：產(chǎn)品技術(shù)要求“穩(wěn)定性”部分，考慮到行標(biāo)對熱穩(wěn)定性的接受程度，本指導(dǎo)原則修訂時(shí)將熱穩(wěn)定性下的穩(wěn)定性指標(biāo)作為產(chǎn)品技術(shù)要求可接受的方法。但由于該行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的起草早于GB/T 26124-2011，且產(chǎn)品穩(wěn)定性是體外診斷試劑的重要性能，因此在性能指標(biāo)要求上未采納行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求的“試劑空白、線性、準(zhǔn)確度”而選擇產(chǎn)品的全部主要性能指標(biāo)進(jìn)行考察。

（十六）關(guān)于臨床試驗(yàn)兩家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)所選的參比試劑應(yīng)一致的說明：考慮到臨床試驗(yàn)的可操作性，不同臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)日常使用的生化分析儀品牌型號的差異，本次修訂將兩家臨床機(jī)構(gòu)使用機(jī)型一致的要求刪除。只要臨床研究所使用的儀器分別為待評試劑和參比試劑的適用機(jī)型即可。臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫（3）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析中斜率b的置信區(qū)間刪除了99%，保留了常用的95%。對同時(shí)適用多種樣本類型的例數(shù)參照《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》中規(guī)定進(jìn)行明確。

（十七）本次修訂刪除了不良事件、生產(chǎn)記錄及其檢驗(yàn)記錄、包裝標(biāo)簽、符合性聲明等內(nèi)容。

三、指導(dǎo)原則審校意見采納情況

（一）采納情況

1.“空白吸光度、空白吸光度變化率”已統(tǒng)一規(guī)范為“試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率”。

2.擬定產(chǎn)品技術(shù)要求中，試劑空白吸光度以及試劑空白吸光度變化率試驗(yàn)用樣本類型，由“蒸餾水、去離子水或其他指定溶液”修訂為“生理鹽水”；線性偏差規(guī)范描述為“[25,100]U/L范圍內(nèi)，偏差應(yīng)不超過±10U/L；(100,750] U/L范圍內(nèi)，偏差不超過±10%?！?，與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)保持一致。相對偏差“T-有證參考物質(zhì)標(biāo)示值”采納審校意見修訂為“T-有證參考物質(zhì)標(biāo)示值，或各濃度人源樣品定值”。

3.分析性能評估資料關(guān)于“不同包裝規(guī)格分析性能評估的要求”，已按審校意見修訂為“如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響”。

4.注冊檢驗(yàn)報(bào)告關(guān)于“出具至少三個(gè)批次樣品的注冊檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價(jià)意見”，已按審校意見修訂為“具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的注冊檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價(jià)意見”。

5.正文和參考文獻(xiàn)中引用的法規(guī)名稱、文號等已補(bǔ)充完整。正文中出現(xiàn)的用詞、符號和字體等問題已按審校建議修訂。

四、指導(dǎo)原則編寫單位和人員

本指導(dǎo)原則修訂人員由浙江省醫(yī)療器械技術(shù)審評人員、行政審批人員、檢驗(yàn)和臨床專家、產(chǎn)品專業(yè)廠家代表等共同組成。