輪狀病毒抗原檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2021年第24號）

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輪狀病毒抗原檢測試劑注冊技術(shù)審查
指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對輪狀病毒抗原檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門審評申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對輪狀病毒抗原檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。同時(shí)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性對研究內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他合理方法也可以采用，并應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

輪狀病毒（Rotavirus，RV）屬于呼腸孤病毒科輪狀病毒屬。輪狀病毒顆粒為球形，直徑70～75nm，負(fù)染后在電鏡下觀察，病毒外形呈車輪狀。輪狀病毒基因組總長約18kb，由11個(gè)節(jié)段的雙股RNA組成，分別編碼6個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（VP1～4，VP6和VP7）和5-6個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NSP1～NSP5/6）。根據(jù)內(nèi)層衣殼蛋白VP6的血清型，目前主要將輪狀病毒分為A～G群。已知A、B、C群輪狀病毒可致人類急性胃腸炎，其中A群輪狀病毒最為常見，是引起嬰幼兒急性腸胃炎的主要病原體之一。B群輪狀病毒可在兒童和成人中暴發(fā)流行。C群輪狀病毒的發(fā)病率相對較低。

輪狀病毒根據(jù)VP6蛋白的兩個(gè)抗原決定簇可分為4個(gè)亞群（Ⅰ，Ⅱ，Ⅰ＋Ⅱ，非Ⅰ非Ⅱ）。根據(jù)VP7和VP4表達(dá)中和抗原的不同，又可分為多個(gè)血清型或基因型。VP7蛋白是糖基化的蛋白，決定G的血清型。VP4是蛋白酶敏感蛋白，決定P的血清型/基因型。目前世界范圍內(nèi)流行的A群輪狀病毒主要為G1、G2、G3、G4、G9、G12等血清型，P分型主要為P[4]、P[8]和P[6]等基因型。我國常見的A群輪狀病毒型別主要為G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]、G2P[4]等。

輪狀病毒可污染食物、水和環(huán)境等，主要通過糞-口途徑傳播。輪狀病毒感染的典型癥狀為嘔吐、腹痛、腹瀉，部分伴發(fā)熱，嚴(yán)重脫水和/或電解質(zhì)紊亂者可能會出現(xiàn)休克、昏迷甚至死亡。

本指導(dǎo)原則適用于以抗原抗體反應(yīng)為原理，對人糞便樣本或其他適用樣本中的輪狀病毒進(jìn)行體外定性檢測的試劑，臨床用于急性胃腸炎患者輪狀病毒感染的輔助診斷。對于采用其他檢測方法的試劑，有利之處可參照執(zhí)行。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

主要包括臨床適應(yīng)癥背景情況、產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)以及其他內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述應(yīng)明確試劑盒可檢測的輪狀病毒具體群組；其他內(nèi)容包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從檢驗(yàn)方法及臨床適用范圍等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號，以下簡稱《公告》）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料的研究資料

主要原材料包括抗原、抗體、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如主要原材料源于外購，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對比篩選試驗(yàn)資料、供應(yīng)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。申請人應(yīng)對各主要原材料均明確質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1.特異性抗原、抗體

病原體特異的抗原、抗體是該類產(chǎn)品的關(guān)鍵原材料。對于抗原，如為天然抗原應(yīng)明確來源，如為重組抗原應(yīng)明確相應(yīng)的核酸或者蛋白序列信息。應(yīng)詳述抗體所針對的抗原表位和抗體制備所用的免疫原，提交確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)，還應(yīng)提交抗體來源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

2.其他主要原材料

除上述主要原材料外，產(chǎn)品中包含的其他主要原材料，如其他抗體、膠體金、硝酸纖維素膜、微孔板、樣本稀釋液等，均應(yīng)進(jìn)行選擇及驗(yàn)證，并提交相關(guān)資料。明確主要原材料的供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

3.試劑盒質(zhì)控品/質(zhì)控線

產(chǎn)品應(yīng)設(shè)置合理的質(zhì)控品/質(zhì)控線。質(zhì)控品（如適用）應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平。陽性質(zhì)控品可選擇滅活的病毒株或臨床陽性樣本，陰性質(zhì)控品可選擇臨床陰性樣本等。提交質(zhì)控品/質(zhì)控線相關(guān)原料的來源、選擇和性能確認(rèn)等相關(guān)研究資料，明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。企業(yè)應(yīng)對質(zhì)控品/質(zhì)控線的檢測結(jié)果做出明確的范圍要求（試驗(yàn)有效性的判斷）。

4.企業(yè)參考品

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、陰陽性及濃度/滴度確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)驗(yàn)證資料。企業(yè)參考品的基質(zhì)應(yīng)與實(shí)際樣本相同。

陽性參考品應(yīng)至少包括所有常見型別的病毒株或臨床陽性樣本，并設(shè)置不同滴度水平。A組輪狀病毒型別應(yīng)至少包括G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]和G2P[4]等。

陰性參考品應(yīng)考慮檢測特異性的評價(jià)，應(yīng)納入正常臨床樣本、含干擾因素的樣本及其他病原體特異性抗原陽性樣本。

檢測限參考品可設(shè)置病毒株/臨床陽性樣本的系列梯度樣本，其中應(yīng)包含檢測限附近水平。A組輪狀病毒型別應(yīng)至少包括G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]和G2P[4]等。

精密度參考品一般包括弱陽性水平、中/強(qiáng)陽性水平。

（二）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

2.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

3.包被/標(biāo)記工藝研究，申請人應(yīng)考慮如包被/標(biāo)記液量、濃度、時(shí)間、條件等指標(biāo)對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4.顯色系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹以及最適條件研究。

5.反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、判讀時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌液體積和洗滌次數(shù)（如涉及）等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6.反應(yīng)體系中樣品加樣方式及加樣量確定：通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。

（三）分析性能評估

申請人應(yīng)提交對試劑盒的全部性能進(jìn)行評估的資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能評估的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、人員及數(shù)量、適用儀器、儀器掃描模式、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源（如涉及）等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)文件或指導(dǎo)原則進(jìn)行。建議著重對以下適用分析性能進(jìn)行研究：

1.樣本采集和處理

研究對保存液成分、濃度和使用量的要求；具體采樣量和采樣方式的要求；樣本運(yùn)輸和保存要求等。

2.最低檢測限

2.1最低檢測限的確定

在進(jìn)行最低檢測限研究時(shí)，應(yīng)先進(jìn)行檢測限范圍的初步確認(rèn)。最低檢測限的確定試驗(yàn)建議采用梯度稀釋的病毒、每個(gè)梯度的病毒液重復(fù)3-5份、每份重復(fù)檢測不少于20次，通常將具有90%-95%以上陽性檢出率的病毒水平作為最低檢測限。建議采用蝕斑形成單位（plaque forming units，PFU）或半數(shù)組織培養(yǎng)感染量（50% tissue culture infectious dose，TCID50）法進(jìn)行病毒滴度的滴定，并采用上述兩種方式作為病毒濃度的表示方式。

2.2最低檢測限的驗(yàn)證

應(yīng)在最低檢測限水平附近，選擇不同來源的病毒株進(jìn)行最低檢測限的驗(yàn)證。

最低檢測限的驗(yàn)證應(yīng)包含輪狀病毒所有常見型別（至少包括G9P[8]、G3P[8]、G1P[8]、G2P[4]等，以及近年來我國流行的型別）。試驗(yàn)采用的稀釋液應(yīng)與適用樣本類型的性質(zhì)一致。應(yīng)提供詳細(xì)的病毒滴度的確定方法，同時(shí)應(yīng)詳細(xì)描述病毒樣本的確認(rèn)方法及驗(yàn)證結(jié)果。

3.包容性

申請人應(yīng)使用輪狀病毒所有常見型別的多個(gè)病毒株，進(jìn)行包容性的驗(yàn)證，以考察試劑對不同病毒株的檢出能力?？蓮淖畹蜋z出限、重復(fù)性、準(zhǔn)確性等方面進(jìn)行驗(yàn)證，提供樣本相關(guān)信息及病毒濃度的確認(rèn)方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

4.精密度

應(yīng)對可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，包括檢測時(shí)間、分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測輪次等要素。設(shè)定合理的精密度評價(jià)周期，對批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評價(jià)。用于精密度評價(jià)的臨床樣本應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣本、臨界陽性樣本、（中或強(qiáng)）陽性樣本，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/p>

5.特異性

5.1交叉反應(yīng)

用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面可能性：抗原結(jié)構(gòu)的同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部位可能存在的其他微生物。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。申請人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

建議用于交叉反應(yīng)研究的病原微生物至少包括：腸道腺病毒，腸道病毒、杯狀病毒（如諾如病毒）、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、星狀病毒、金黃色葡萄球菌、傷寒沙門菌、甲/乙/丙副傷寒沙門菌、腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌、小腸耶爾森菌、鏈球菌、痢疾志賀氏菌、彎曲桿菌、致瀉性大腸桿菌、艱難芽孢梭狀桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、弧菌等，以上病原體應(yīng)包含常見型別或亞型。建議使用病原體培養(yǎng)液/臨床樣本作為研究樣本類型。

應(yīng)使用至少20例正常人樣本進(jìn)行驗(yàn)證，考察樣本中存在的人體正常菌群、條件致病菌等的交叉反應(yīng)影響。

5.2干擾研究

建議申請人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下，使用病毒抗原臨界陽性水平樣本、陰性樣本進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。

推薦用于干擾試驗(yàn)的物質(zhì)包括：血液（血紅蛋白、白細(xì)胞）、腸道炎性分泌液、粘液（粘蛋白）、脂肪、緩解腹瀉或其他胃腸道癥狀的藥物、抗細(xì)菌類藥物、抗病毒類藥物等。

6.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

建議采用高滴度的病毒株/陽性樣本進(jìn)行梯度稀釋后分別檢測，每個(gè)梯度重復(fù)3至5次，將顯色深度或檢測值隨滴度升高反而變淺或降低時(shí)的滴度作為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)時(shí)的最低滴度。

7.其他

應(yīng)提供企業(yè)參考品驗(yàn)證資料：采用至少三批產(chǎn)品對企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

如有不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交性能評估資料，或提供不同包裝規(guī)格無性能差異的依據(jù)。如適用不同機(jī)型，應(yīng)分別提交性能評估資料，并在產(chǎn)品說明書【適用儀器】項(xiàng)下明確所有機(jī)型。注意不同樣本類型的適用性，根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行分析性能評估。

應(yīng)明確試劑盒可檢測的輪狀病毒群組，提交采用該群組輪狀病毒進(jìn)行的分析性能研究資料，同時(shí)在產(chǎn)品名稱和產(chǎn)品說明書【預(yù)期用途】項(xiàng)下明確可檢測群組。對于其他群組，建議進(jìn)行相應(yīng)的交叉反應(yīng)驗(yàn)證，如有可能存在的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在產(chǎn)品說明書【檢驗(yàn)結(jié)果的局限性】項(xiàng)下進(jìn)行提示。

（四）陽性判斷值的研究

提交對申報(bào)試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的陽性判斷值（cut-off，CO）確定的研究資料，包括具體的試驗(yàn)方案、人群及受試者樣本選擇、評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等。建立陽性判斷值使用的樣本來源的選擇應(yīng)考慮到不同的地理區(qū)域、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響。另外，不同的樣本類型如有差異應(yīng)分別確定。

如適用，可采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）的分析方式來選擇確定合理的陽性判斷值；如結(jié)果存在灰區(qū)（equivocal zone），應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。

（五）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開封（使用）穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶（復(fù)溶）穩(wěn)定性等。研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)提交不同使用環(huán)境條件對檢測結(jié)果影響的研究資料。例如，試紙實(shí)時(shí)和開封穩(wěn)定性研究，不同溫度和濕度條件下的性能研究等。

（六）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。下面僅說明臨床試驗(yàn)中應(yīng)關(guān)注的重點(diǎn)問題。

1.研究方法

此類產(chǎn)品的樣本類型一般為糞便樣本。

對于已有同類產(chǎn)品上市的試劑的臨床研究，選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與之進(jìn)行對比試驗(yàn)研究，評價(jià)兩種方法檢測結(jié)果的一致性，評價(jià)指標(biāo)通常包括陽性符合率、陰性符合率等。對比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。

對于無同類產(chǎn)品上市的情況，其臨床研究可選擇與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究的方法，評價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑的臨床性能。

2.受試者選擇

輪狀病毒抗原檢測試劑一般用于急性胃腸炎患者輪狀病毒感染的輔助診斷。根據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑預(yù)期用途，臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇具有急性胃腸炎癥狀（如嘔吐，腹瀉等），急性胃腸炎相似癥狀的人群作為研究對象，制定合理的臨床試驗(yàn)受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)。此外，考慮輪狀病毒感染的流行病學(xué)特征，臨床試驗(yàn)應(yīng)主要入組嬰幼兒人群，也應(yīng)納入一定量成年人病例，以及各種可能的干擾樣本和交叉反應(yīng)樣本。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量和要求

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇應(yīng)充分考慮試驗(yàn)用體外診斷試劑的特點(diǎn)和預(yù)期用途，選擇具有代表性的機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，包括受試人群的代表性等。

4.臨床評價(jià)指標(biāo)

該類產(chǎn)品臨床評價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。如試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對比研究，其臨床評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。

5.臨床試驗(yàn)樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報(bào)產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可選擇陰性符合率和陽性符合率，或臨床特異度和臨床靈敏度，分別估算最低陰性樣本例數(shù)和陽性樣本例數(shù)。

如臨床試驗(yàn)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。

公式中，n為樣本量；Z1-α、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為試驗(yàn)用體外診斷試劑評價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

基于現(xiàn)有認(rèn)知，評價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）即輪狀抗原檢測試劑陽性符合率建議不低于90%，陰性符合率建議不低于95%。獲得臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)后，證明產(chǎn)品相對于對比試劑的陰/陽性符合率（置信區(qū)間下限）不低于預(yù)設(shè)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)評價(jià)指標(biāo)P接近100%時(shí)，上述樣本量估算方法可能不適用，應(yīng)考慮選擇更加適宜的方法進(jìn)行樣本量估算，如精確概率法等。

對于尚無同類產(chǎn)品上市的情況，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性和臨床需求進(jìn)行合理的樣本量估算。

臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還需納入干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本，同時(shí)還要考慮受試者脫落剔除率等情況。如臨床試驗(yàn)研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。

6.統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法對臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對于試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市產(chǎn)品（對比試劑）的一致性評價(jià)，一般選擇2×2表的形式總結(jié)兩種試劑/方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其可信區(qū)間。

對于不一致樣本，應(yīng)進(jìn)行原因分析。如臨床試驗(yàn)方案規(guī)定采用其他方法進(jìn)行確認(rèn)，則確認(rèn)結(jié)果不應(yīng)納入統(tǒng)計(jì)分析。

7.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會的審查意見。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

9.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行統(tǒng)一的臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。

10、臨床試驗(yàn)報(bào)告

臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，所有臨床試驗(yàn)操作應(yīng)符合說明書的相關(guān)要求，例如由于糞便樣本不易均質(zhì)化，臨床試驗(yàn)中應(yīng)明確樣本采集方法和樣本用量等信息，對整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法，得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（七）注冊檢驗(yàn)

應(yīng)提供符合產(chǎn)品技術(shù)要求的、在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告，應(yīng)提供連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)合格報(bào)告。該項(xiàng)目目前已有國家參考品，應(yīng)采用國家參考品進(jìn)行注冊檢測。

（八）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（原國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

下面對產(chǎn)品說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1試劑盒用于定性檢測人體***樣本（如糞便）中的*群輪狀病毒抗原。

1.2相關(guān)背景信息：簡要描述病原體生物學(xué)特征及致病性，感染后臨床表現(xiàn)，相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，臨床目標(biāo)人群，產(chǎn)品功能（如可用于輪狀病毒感染的輔助診斷）等。

2.【檢驗(yàn)原理】

描述試劑盒的技術(shù)原理，可結(jié)合圖示進(jìn)行說明。

3.【主要組成成分】

3.1詳細(xì)說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、成分、濃度等信息，如含有生物源性物質(zhì)，應(yīng)說明其（生物學(xué)）來源、活性及其他特性；對于膠體金、免疫層析法等試劑應(yīng)描述試劑條/卡結(jié)構(gòu)組成。說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必需的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱以及備案憑證號或注冊證號（如有）等信息。

4.【儲存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲存條件及效期，明確溫濕度要求。

5.【適用機(jī)型】（如適用）

注明所有適用的儀器型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。酶標(biāo)儀應(yīng)明確波長要求。

6.【樣本要求】

說明對樣本采集、處理、保存等方面的要求，包括采樣要求、采集器的要求、離心條件、運(yùn)送條件、保存條件及效期、凍融要求、預(yù)處理方法等，相關(guān)內(nèi)容應(yīng)經(jīng)過前期驗(yàn)證。

7.【檢驗(yàn)方法】

7.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：檢測試劑及樣本的復(fù)溫要求等。

7.2試劑配制方法，試劑開封后使用方法等。

7.3樣本稀釋的方法。

7.4試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器條件等。

7.5質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。

7.6可采用圖示形式顯示正確的檢驗(yàn)操作方法、程序及注意事項(xiàng)等。特別注意應(yīng)強(qiáng)調(diào)操作溫度及濕度條件、讀取結(jié)果的時(shí)間。

7.7特別說明檢驗(yàn)操作過程中的注意事項(xiàng)。

8.【陽性判斷值】（如適用）

明確陽性判斷值，簡要描述陽性判斷值確定的試驗(yàn)方法。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)或計(jì)算方法，如有灰區(qū)判定，應(yīng)詳細(xì)說明灰區(qū)樣本的處理方法。建議可采用圖示形式描述結(jié)果判讀方法（例如膠體金、免疫層析法等試劑）。

10.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測方法及適用范圍等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

11.1對相應(yīng)國家參考品檢測的符合情況。

11.2企業(yè)內(nèi)部參考品符合率。簡單介紹各企業(yè)參考品的組成、來源以及濃度梯度設(shè)置等信息。

11.3最低檢測限：簡要介紹評價(jià)方法、所用病毒株或樣本情況以及評價(jià)結(jié)果。

11.4對包容性的研究情況進(jìn)行總結(jié)。

11.5對精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。

11.6分析特異性

11.6.1交叉反應(yīng)：詳述交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

11.6.2干擾物質(zhì)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

11.7鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對高濃度鉤狀效應(yīng)的驗(yàn)證情況進(jìn)行總結(jié)。

11.8臨床試驗(yàn)：簡要介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組分（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測，結(jié)果為陰性，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

12.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

三、參考文獻(xiàn)

1.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊管理辦法（局令第5號），2014年7月.

2.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則，2014年9月.

3.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則，2014年9月.

4.國家食品藥品監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式，2014年9月.

5.兒童輪狀病毒胃腸炎預(yù)防診療專家共識（2020年版）[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2020（04）.

6.Knipe D M，Howley PM. Fields Virology，6th ed. Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，PA，2013.

四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心