弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2014年第2號(hào)）

附件：弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2014年第2號(hào)）.doc

弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及
G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑
技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G,IgG）抗體親合力檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體及IgG抗體親合力檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

弓形蟲( Toxoplasma, TOXO ) 、風(fēng)疹病毒( Rubella virus , RV) 、巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus , CMV) 及單純皰疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 四種病原體，以縮寫形式ToRCH命名。上述四種病原體已引起圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)家和優(yōu)生優(yōu)育學(xué)家的關(guān)注，如何應(yīng)用應(yīng)基于大量的研究及相關(guān)學(xué)科的診療指南。

依免疫球蛋白重鏈抗原特異性不同，免疫球蛋白可分為G型免疫球蛋白（IgG）、M型免疫球蛋白（IgM）、A型免疫球蛋白（IgA）、E型免疫球蛋白（IgE）和D型免疫球蛋白（IgD）五種類型。ToRCH抗體檢測(cè)試劑，主要檢測(cè)的免疫球蛋白為ToRCH特異性IgG和IgM。在病原體感染的初次體液免疫應(yīng)答中(原發(fā)性感染)，特異性IgM抗體首先出現(xiàn)，但存在時(shí)間較短，通常為數(shù)周到數(shù)月。病原體特異性IgM抗體陽性常提示早期感染，可用于感染急性期的輔助判斷。特異性IgG抗體，在免疫接種后、原發(fā)性感染及再次感染時(shí)都可檢出，且較長時(shí)間存在。

在感染過程中特異性抗體對(duì)抗原親合力隨感染時(shí)間的延長而不斷升高，檢測(cè)IgG抗體親合力，能夠較準(zhǔn)確地判斷感染時(shí)間，可作為ToRCH抗體檢測(cè)的一種補(bǔ)充，高IgG抗體親合力可輔助排除近期原發(fā)性感染。

不同類型的ToRCH特異性抗體檢測(cè)結(jié)果，在ToRCH病原體感染的輔助診斷及免疫狀態(tài)的評(píng)估中，起著重要的指導(dǎo)作用，因此ToRCH特異性抗體檢測(cè)的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。相關(guān)的生產(chǎn)企業(yè)必須充分意識(shí)到該類產(chǎn)品的潛在風(fēng)險(xiǎn)，根據(jù)本指導(dǎo)原則的要求對(duì)該類試劑的安全性和有效性進(jìn)行科學(xué)合理的驗(yàn)證。

ToRCH抗體檢測(cè)試劑是指一類利用免疫學(xué)方法，如酶免疫技術(shù)和化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)等，對(duì)人體血清或血漿樣本中的ToRCH特異性抗體進(jìn)行體外定性和/或半定量和/或定量檢測(cè)的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可用于ToRCH感染輔助診斷及免疫狀態(tài)的評(píng)估。IgG抗體親合力檢測(cè)試劑是一類對(duì)ToRCH特異性IgG抗體陽性的人血清和/或血漿樣本中ToRCH特異性IgG親合力進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于輔助判斷感染時(shí)間，排除近期原發(fā)性感染。本類試劑尚不用作產(chǎn)前篩查。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品臨床適用癥背景情況、預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及臨床適用范圍等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料是注冊(cè)申報(bào)資料的重要組成之一，其內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》（國食藥監(jiān)械〔2007〕609號(hào)）的相關(guān)要求，另外，建議申請(qǐng)人對(duì)以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：

1.特定病原體的生物學(xué)特性，包括形態(tài)與結(jié)構(gòu)、抵抗力、感染過程等。

2.特定病原體感染的傳播途徑、潛伏期、不同人群感染的臨床癥狀、流行病學(xué)以及易感人群的說明。

3.ToRCH特異性抗體及特異性IgG抗體親合力動(dòng)力學(xué)。

（二）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的相應(yīng)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)注明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)ToRCH抗體和IgG抗體親合力檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。

1．【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1試劑盒用于體外定性和/或半定量和/或定量，檢測(cè)人血清和/或血漿樣本中xx的特異性IgG或IgM抗體。用于ToRCH病原體感染的輔助診斷及免疫狀態(tài)的評(píng)估。

1.2試劑盒用于體外定性檢測(cè)人體血清和/或血漿樣本中xx的特異性IgG親合力。作為ToRCH抗體檢測(cè)的一種補(bǔ)充，用于輔助判斷感染時(shí)間，排除近期原發(fā)性感染。

1.3簡單介紹病原體的特征，如特定病原體的生物學(xué)特征、流行病學(xué)、潛伏期、易感人群、不同人群感染后的臨床表現(xiàn)等臨床背景相關(guān)的信息介紹；適用人群的介紹，如具有何種癥狀/體征的患者、相關(guān)的密切接觸者、相關(guān)疾病流行情況、地域要求等。

1.4人群中ToRCH特異性抗體的陽性率、ToRCH特異性抗體的產(chǎn)生、持續(xù)時(shí)間、臨床提示作用及與ToRCH核酸和抗體親合力等其他檢測(cè)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)。

1.5 ToRCH感染的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法介紹。

1.6明確說明ToRCH特異性IgM抗體檢測(cè)不得用于無癥狀人群的產(chǎn)前篩查；不得將本試劑的檢測(cè)結(jié)果單獨(dú)作為終止妊娠的依據(jù)。

1.7特異性IgG抗體的親合力檢測(cè)試劑還應(yīng)介紹親合力動(dòng)力學(xué)，親合力高低與感染時(shí)間的關(guān)系，并明確不得將本試劑IgG抗體的低親合力結(jié)果單獨(dú)作為近期急性感染判斷的依據(jù)。

1.8關(guān)于預(yù)期用途的幾點(diǎn)考慮：

1.8.1 ToRCH抗體檢測(cè)試劑作為病原體抗體檢測(cè)試劑，目前的臨床意義僅限于抗體陰陽性及IgG抗體親合力高低的判斷和病原體特異性IgG抗體滴度變化趨勢(shì)的觀察。

1.8.2 定量檢測(cè)試劑可溯源至國家或國際標(biāo)準(zhǔn)品如WHO標(biāo)準(zhǔn)品等標(biāo)準(zhǔn)品。鑒于現(xiàn)在國際標(biāo)準(zhǔn)品的情況和臨床需求，建議ToRCH IgM檢測(cè)試劑的預(yù)期用途定義為定性檢測(cè)。

1.8.3 如申報(bào)產(chǎn)品聲稱可用于疫苗免疫效果的評(píng)判，則必須以定量試劑盒的形式進(jìn)行申報(bào)。

1.8.4 抗體親合力檢測(cè)項(xiàng)目的確定，應(yīng)建立在明確的臨床意義和技術(shù)可行性基礎(chǔ)上。

2.【主要組成成份】

2.1說明試劑盒包含組份的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息；質(zhì)控品、校準(zhǔn)品，應(yīng)明確具體基質(zhì)成份，由于可能含有人源組份，應(yīng)提供滅活方法及無傳染性確認(rèn)的方法等。另外，校準(zhǔn)品應(yīng)明確溯源性，質(zhì)控品應(yīng)提交靶值單。

2.2對(duì)檢測(cè)中使用的抗原及抗體的信息進(jìn)行簡單介紹，包括抗原的性質(zhì)（如重組抗原、純化的天然抗原、病毒感染細(xì)胞的裂解物等）、所用病毒株或重組抗原的表達(dá)載體、抗體的動(dòng)物源性、抗體的性質(zhì)（單克隆或多克?。?/p>

2.3試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組份，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。

3.【儲(chǔ)存條件及有效期】

詳細(xì)介紹試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息。

4.【適用機(jī)型】

對(duì)于采用酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)試劑應(yīng)明確適用酶標(biāo)儀的波長要求，其他方法學(xué)檢測(cè)試劑應(yīng)明確具體的適用機(jī)型型號(hào)。

5.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

5.1樣本采集前的要求：如采集時(shí)間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

5.2樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。

5.3干擾物的影響：明確脂血、溶血、黃疸血等常見干擾物對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否產(chǎn)生影響，明確可接受的最大干擾物濃度。明確生物污染、纖維蛋白等是否影響檢測(cè)。

5.4樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件（如冷藏、冷凍等）及不同保存條件下的保存時(shí)限和運(yùn)輸條件等。冷藏、冷凍樣本檢測(cè)前是否需要恢復(fù)室溫，冷凍樣本的凍融次數(shù)限制。經(jīng)熱處理樣本是否可用、對(duì)儲(chǔ)存樣本的添加劑要求等。

5.5對(duì)于ToRCH病原體IgM抗體檢測(cè)試劑，如果檢測(cè)系統(tǒng)含有某種IgG抗體的去除技術(shù)（IgG吸附劑），如抗人IgG抗體等，則應(yīng)包括IgG吸附劑使用相關(guān)的注意事項(xiàng)。例如：經(jīng)IgG吸附劑處理的樣本不能用于IgG類抗體的檢測(cè)；在檢測(cè)IgM類抗體的同時(shí)，檢測(cè)處理過的混合物中的IgG類抗體，以證實(shí)對(duì)IgG和類風(fēng)濕因子（RF）等去除的有效性。

5.6對(duì)于IgG抗體親合力檢測(cè)試劑應(yīng)明確適用的特異性IgG抗體陽性樣本的濃度范圍或信號(hào)值范圍。

6.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

6.1實(shí)驗(yàn)環(huán)境：檢測(cè)試劑及樣本的復(fù)溫要求及相關(guān)注意事項(xiàng)。例如：凍存樣本在復(fù)融后應(yīng)經(jīng)過充分的混勻再行檢測(cè)。

6.2 試劑配制方法、注意事項(xiàng)，試劑開封后使用方法及注意事項(xiàng)等。

6.3 高濃度樣本稀釋的方法及注意事項(xiàng)。

6.4 試驗(yàn)條件：操作步驟、溫度、時(shí)間、儀器波長以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)等。

6.5 定標(biāo)（如適用）：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定，對(duì)需要進(jìn)行重新定標(biāo)情況的說明及對(duì)定標(biāo)周期的建議。

6.6 質(zhì)量控制：操作步驟，質(zhì)控結(jié)果的要求（試驗(yàn)有效性的判斷），質(zhì)控結(jié)果不符合要求的處理方式。如果質(zhì)控品和病人樣本的使用方法不同，生產(chǎn)商應(yīng)注明必要的指導(dǎo)和解釋。建議在質(zhì)控品結(jié)果解釋環(huán)節(jié)注明以下字樣：“如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，實(shí)驗(yàn)室不應(yīng)出具檢測(cè)報(bào)告”。

7.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

詳細(xì)描述檢測(cè)結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)或計(jì)算方法。對(duì)陰陽性及血清轉(zhuǎn)換或親合力高低臨床意義的說明，對(duì)后續(xù)試驗(yàn)的建議。例：對(duì)于巨細(xì)胞病毒IgG抗體檢測(cè)灰區(qū)樣本，建議另外進(jìn)行巨細(xì)胞病毒IgM抗體檢測(cè)或于2周后進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)；對(duì)于IgG抗體親合力灰區(qū)樣本，應(yīng)于2周后進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。對(duì)于半定量和定量的特異性IgG抗體檢測(cè)試劑，還應(yīng)明確抗體滴度變化的意義。由于ToRCH IgM假陽性結(jié)果可能造成不良后果，建議提示臨床醫(yī)生對(duì)所有ToRCH IgM陽性結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床病史及其他的檢測(cè)結(jié)果綜合判斷，不得作為ToRCH急性感染診斷的唯一依據(jù)。

對(duì)于ToRCH IgG定量檢測(cè)試劑，由于抗體的檢測(cè)結(jié)果與檢測(cè)方法及量值的溯源性相關(guān)，不同檢測(cè)系統(tǒng)間的結(jié)果可能不一致。建議企業(yè)給予相關(guān)提示。

對(duì)于IgG抗體親合力檢測(cè)試劑，還應(yīng)明確指出應(yīng)配合相應(yīng)的ToRCH IgG和IgM抗體檢測(cè)試劑結(jié)果進(jìn)行分析。應(yīng)提示：臨床醫(yī)生檢測(cè)的低親合力結(jié)果不得作為近期急性感染判斷的依據(jù)。

8.【檢驗(yàn)方法局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景、檢測(cè)方法及適用范圍等信息，對(duì)可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，主要包括以下描述，請(qǐng)申請(qǐng)人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

8.1本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對(duì)患者的臨床診斷應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、流行病學(xué)、其他實(shí)驗(yàn)室檢查（如病原學(xué)檢測(cè)）等信息綜合考慮。

8.2感染初期，ToRCH特異性抗體未產(chǎn)生或低于檢測(cè)限，會(huì)導(dǎo)致陰性結(jié)果，如懷疑有病原體感染，應(yīng)提示患者在一段時(shí)間內(nèi)復(fù)查，如2周以上，抽取第二份樣本，并在與第一份樣本同條件下檢測(cè)，以確定是否有初次感染的血清轉(zhuǎn)化或ToRCH特異性IgM或IgG抗體明顯升高。（企業(yè)應(yīng)注明第一份樣本的保存條件，并提交相應(yīng)的支持資料）

8.3 ToRCH特異性IgG陰性，可能出現(xiàn)于疾病急性感染的早期，陰性結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床癥狀或病原接觸情況，并結(jié)合其他診斷檢測(cè)方法加以解釋。

8.4 對(duì)于采用間接法的ToRCH IgM抗體檢測(cè)試劑，高滴度ToRCH特異性IgG抗體會(huì)與特異性IgM抗體競爭抗原結(jié)合部位，會(huì)使檢測(cè)的敏感性降低，特異性IgM抗體結(jié)果可能會(huì)出現(xiàn)假性低值或陰性結(jié)果。

8.5 由于孕婦ToRCH IgM抗體的實(shí)驗(yàn)室檢查存在較高的假陽性風(fēng)險(xiǎn)，不能可靠地鑒定胎兒患病的風(fēng)險(xiǎn)，故不建議對(duì)無癥狀孕婦的ToRCH IgM抗體進(jìn)行篩查。不得將本試劑的檢測(cè)結(jié)果單獨(dú)作為終止妊娠的依據(jù)。

8.6 免疫功能受損或接受免疫抑制治療的患者，如人類免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治療的患者，其抗體及抗體親合力檢測(cè)的參考價(jià)值有限，可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋。

8.7 在近幾個(gè)月內(nèi)接受過輸血或其他血液制品治療的人群，對(duì)其陽性檢測(cè)結(jié)果的分析應(yīng)慎重。

8.8 部分ToRCH（如風(fēng)疹病毒）特異性IgM抗體不僅出現(xiàn)于初次感染，當(dāng)二次感染和復(fù)發(fā)感染時(shí)也可能出現(xiàn)。個(gè)別個(gè)體的ToRCH特異性IgM抗體,在初次感染較長時(shí)間后仍能檢出，因此對(duì)特異性IgM抗體陽性在判斷初次感染時(shí)間的解釋中應(yīng)慎重。

8.9 當(dāng)處于低流行率地區(qū)的無癥狀人群或已接種過特定ToRCH疫苗的個(gè)體檢出ToRCH IgM陽性結(jié)果時(shí)，應(yīng)警惕可能出現(xiàn)的假陽性結(jié)果。同時(shí)建議臨床醫(yī)生結(jié)合其癥狀/體征、病史、流行病學(xué)、其他實(shí)驗(yàn)室檢查（如IgG抗體親合力和病原學(xué)檢測(cè)）進(jìn)行判斷。建議對(duì)申報(bào)試劑臨床研究中的病例人群特征進(jìn)行說明，并對(duì)適用人群的年齡、地域等特征進(jìn)行明示。

8.10 人血清中的異嗜性抗體可能與試劑中的免疫球蛋白結(jié)合干擾試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)于經(jīng)常接觸動(dòng)物或動(dòng)物血清制品的人群，應(yīng)警惕可能出現(xiàn)的異常干擾結(jié)果。

8.11 接受過小鼠單克隆抗體治療的患者樣本中，可能含有人抗小鼠抗體（human anti-mouse antibodies, HAMA）。對(duì)于試劑盒組成成份中含有小鼠源性抗體的檢測(cè)試劑，若待測(cè)樣本中含有HAMA，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

8.12 體內(nèi)存在的高濃度的鏈霉親合素（親合素）抗體和發(fā)光標(biāo)志物抗體會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

8.13 由于ToRCH IgG抗體親合力成熟過程存在個(gè)體差異，個(gè)別個(gè)體在初次感染較長時(shí)間后仍呈現(xiàn)ToRCH IgG抗體低親合力，因此不得將本試劑IgG抗體的低親合力結(jié)果單獨(dú)作為近期急性感染判斷的依據(jù)。

9.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

9.1對(duì)相應(yīng)國家參考品（如有）檢測(cè)的符合情況。

9.2最低檢測(cè)限：說明試劑的最低檢測(cè)濃度或滴度，簡單介紹最低檢測(cè)限的確定方法。

9.3企業(yè)內(nèi)部陽性和陰性參考品符合率，簡單介紹陽性參考品的來源、濃度梯度、陰性參考品的組成、來源以及濃度梯度設(shè)置等信息。

9.4 精密度：精密度參考品的組份、濃度及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

9.5 分析特異性

9.5.1交叉反應(yīng)：對(duì)易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體的高水平抗體、高濃度ToRCH特異性IgG抗體等的驗(yàn)證情況。

9.5.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如溶血、脂血、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述），有關(guān)高濃度總IgM和總IgG抗體、抗核抗體、類風(fēng)濕因子、系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血等的干擾驗(yàn)證。

9.6鉤狀（HOOK）效應(yīng)：對(duì)高濃度ToRCH特異性抗體鉤狀效應(yīng)的驗(yàn)證情況。

9.7 對(duì)比試驗(yàn)研究（如有）：簡要介紹對(duì)比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

9.8抗體滴度變化（適用于半定量和/或定量檢測(cè)試劑）和診斷靈敏度：介紹血清轉(zhuǎn)換盤的來源，將檢測(cè)結(jié)果以圖或表的形式列出。

9.9稀釋線性（適用于半定量和/或定量檢測(cè)試劑）：簡要介紹評(píng)價(jià)方法，將評(píng)價(jià)結(jié)果以表格的形式明示。

9.10檢測(cè)范圍（適用于半定量和/或定量檢測(cè)試劑）：簡要介紹檢測(cè)范圍確定的方法及超出檢測(cè)范圍樣本的處理方法。

10.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

10.1有關(guān)試劑盒內(nèi)人源組份（如有）生物安全性的警告。如：試劑盒內(nèi)對(duì)照品（質(zhì)控品）或其他可能含有人源物質(zhì)的組份，雖已經(jīng)通過了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、人類免疫缺陷病毒1/2型抗體（HIV1/2-Ab）、丙型肝炎病毒抗體（HCV-Ab）等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組份作為潛在傳染源對(duì)待。

10.2有關(guān)實(shí)驗(yàn)操作、樣本保存及處理等其他注意事項(xiàng)。

（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說明

擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求》的相關(guān)規(guī)定。另外，對(duì)于國產(chǎn)試劑，應(yīng)參考《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），將擬申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。

ToRCH抗體定性檢測(cè)試劑的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：物理性狀、陽性參考品符合率、陰性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限（分析靈敏度）等。半定量和/或定量抗體檢測(cè)試劑除上述性能指標(biāo)外，還應(yīng)包含線性和準(zhǔn)確性指標(biāo)。陽性參考品主要考察對(duì)不同滴度情況下的檢測(cè)符合性。陰性參考品則是對(duì)分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證，應(yīng)主要包括易發(fā)生交叉反應(yīng)的其他病原體特異性抗體和常見干擾物質(zhì)的假陽性情況的考核。ToRCH IgG抗體親合力檢測(cè)試劑，應(yīng)包含符合率及精密度等要求。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

（四）注冊(cè)檢測(cè)

根據(jù)《辦法》要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢測(cè)。對(duì)于已經(jīng)有國家參考品的項(xiàng)目，在注冊(cè)檢測(cè)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國家參考品進(jìn)行,對(duì)于目前尚無國家參考品的項(xiàng)目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)自行建立穩(wěn)定的質(zhì)控體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。

（五）主要原材料研究資料

1．試劑盒所用病原體抗原的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料，主要包括以下兩方面：

1.1 企業(yè)自制抗原

如為天然抗原，則應(yīng)對(duì)病原體毒株選擇、病原體培養(yǎng)、抗原提取及純化、鑒定等實(shí)驗(yàn)過程予以詳述；如為重組抗原，則應(yīng)提交有關(guān)特定基因選擇、基因序列、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、抗原表達(dá)及抗原純化、鑒定等詳細(xì)內(nèi)容。

1.2 企業(yè)外購抗原，則應(yīng)詳述抗原的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗原性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請(qǐng)人對(duì)該抗原技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該抗原作為主要原材料的依據(jù)。供貨商應(yīng)相對(duì)固定，不得隨意更換。

2．試劑盒所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料，主要包括以下兩方面：

2.1 企業(yè)自制抗體

如使用天然抗原作為免疫原則應(yīng)明確該天然抗原的來源；如使用重組抗原或其他人工合成抗原作為免疫原，應(yīng)提供相應(yīng)的核酸組分及重組抗原的序列信息。申請(qǐng)人對(duì)所選抗體的技術(shù)指標(biāo)要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價(jià)等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

2.2 企業(yè)外購抗體，應(yīng)詳述抗體的名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。供貨商應(yīng)相對(duì)固定，不得隨意更換。

3. 其他主要原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如固相載體、化學(xué)發(fā)光劑、反應(yīng)緩沖液等，該類原輔料一般均為外購，應(yīng)詳述每一原輔料的外購方名稱，提交外購方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書，詳述申請(qǐng)人對(duì)每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及申請(qǐng)人確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。

4. 試劑盒質(zhì)控品和/或校準(zhǔn)品的制備、定值和/或溯源及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證資料。校準(zhǔn)品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家或國際參考品（如有），質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性和陽性兩個(gè)水平。校準(zhǔn)品和質(zhì)控品基質(zhì)應(yīng)與待測(cè)樣本相同或相似。

5. 企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析及相關(guān)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證資料。應(yīng)提供對(duì)參考品性質(zhì)確認(rèn)的方法或試劑（建議采用國內(nèi)已上市的、臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類試劑）的相關(guān)信息。陰性參考品除正常血清樣本外，還應(yīng)包含可能產(chǎn)生干擾的溶血、脂血、黃疸及自身免疫性疾病患者血和其他易混淆、交叉的感染性疾病患者血的特異性血清樣本。

（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1. 主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2. 產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3. 包被工藝研究，申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時(shí)間等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。

4. 顯色（發(fā)光）系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。

5. 實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。

6. 酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

7. 體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過試驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

（七）分析性能評(píng)估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對(duì)于本類產(chǎn)品建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

1. 最低檢測(cè)限

選取特定滴度的ToRCH特異性抗體樣本，做系列倍比稀釋，將檢測(cè)結(jié)果的陽性率在90%以上（n≥20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測(cè)限。

對(duì)于有國際或國家定量參考品的檢測(cè)項(xiàng)目，（目前僅限于TOXO IgG和RV IgG）和半定量IgG檢測(cè)項(xiàng)目，最低檢測(cè)限的確定可采用在一次運(yùn)行中將空白樣本重復(fù)測(cè)定20次，計(jì)算20次結(jié)果的均值與標(biāo)準(zhǔn)差（SD），以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差的方法，或其他合理的方法。

2. 抗體滴度變化（適用于半定量和/或定量檢測(cè)試劑）和診斷靈敏度

2.1 ToRCH抗體檢測(cè)試劑：介紹血清轉(zhuǎn)換盤的組成和來源。檢測(cè)血清轉(zhuǎn)換盤，用于評(píng)價(jià)檢測(cè)試劑的診斷靈敏度及監(jiān)測(cè)抗體滴度變化趨勢(shì)的能力。對(duì)于TOXO、RV等已有商業(yè)化血清轉(zhuǎn)換盤的檢測(cè)項(xiàng)目，應(yīng)選用商業(yè)化血清轉(zhuǎn)換盤進(jìn)行研究；對(duì)于部分無商業(yè)化血清轉(zhuǎn)換盤的檢測(cè)項(xiàng)目，可選擇合理的方法,如將標(biāo)化的血清樣本稀釋等，對(duì)抗體滴度變化及診斷靈敏度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.2 ToRCH IgG抗體親合力檢測(cè)試劑：對(duì)急性感染（3～4個(gè)月內(nèi)）和既往感染樣本進(jìn)行研究，樣本可來自于血清轉(zhuǎn)化盤或基于臨床診斷的臨床樣本，以評(píng)價(jià)臨床診斷靈敏度。

3. 分析特異性

3.1交叉反應(yīng)

3.1.1 對(duì)抗原結(jié)構(gòu)相近或臨床癥狀相似的其他病原體（見表1）感染病人的高水平特異性抗體血清進(jìn)行交叉反應(yīng)研究，其中用于交叉反應(yīng)研究用的抗體類型應(yīng)與待測(cè)目的抗體類型相同，如檢測(cè)ToRCH IgG抗體，則應(yīng)研究其與相關(guān)病原體特異性IgG抗體的交叉反應(yīng)。

3.1.2 高濃度病原體特異性IgG抗體與特異性IgM抗體的交叉反應(yīng)驗(yàn)證。

3.1.3如果檢測(cè)試劑采用基因重組抗原，應(yīng)增加對(duì)重組基因?qū)胛⑸锾禺愋钥贵w的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)。例如，如果采用大腸桿菌作為宿主菌，采用原核載體作為表達(dá)載體，建議考慮大腸桿菌宿主自身蛋白以及載體骨架編碼的蛋白與被測(cè)物之間可能產(chǎn)生的交叉反應(yīng)。

申請(qǐng)人應(yīng)提交所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體來源信息、對(duì)于有國家或國際參考品的交叉反應(yīng)物質(zhì)還應(yīng)提供濃度確認(rèn)等相關(guān)信息。建議申請(qǐng)人將有關(guān)交叉反應(yīng)驗(yàn)證的信息以列表的方式在產(chǎn)品說明書的【產(chǎn)品性能指標(biāo)】項(xiàng)中列出。

表1 用于交叉反應(yīng)研究的病原體（推薦）

注：*標(biāo)注的為必做項(xiàng)目。

3.2干擾實(shí)驗(yàn)

3.2.1內(nèi)源性干擾

對(duì)樣本中常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)（見表2）進(jìn)行檢測(cè)。方法為：對(duì)ToRCH特異性抗體陰性、弱陽性（臨界濃度）的臨床或模擬添加樣本分別進(jìn)行驗(yàn)證，樣本量選擇應(yīng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，確定可接受的干擾物質(zhì)的極限濃度。

3.2.2抗凝劑的干擾

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究。方法如下：對(duì)不少于50例源自同一患者的ToRCH特異性抗體陰性和弱陽性（略高于臨界值）的血清和血漿樣本進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證申報(bào)試劑對(duì)于血清和血漿樣本的檢測(cè)結(jié)果的一致性；如適用于幾種抗凝劑，建議對(duì)不少于50例源自同一患者的ToRCH特異性抗體陰性和弱陽性（略高于臨界值）的不同抗凝劑的血漿樣本進(jìn)行檢測(cè)，以驗(yàn)證抗凝劑之間的一致性。

3.2.3 ToRCHIgM抗體檢測(cè)特異性驗(yàn)證

可采用對(duì)至少10份含有ToRCH特異性IgM抗體的樣本進(jìn)行IgM破壞實(shí)驗(yàn)研究，方法為采用特定的化學(xué)制劑（如2－巰基乙醇或二硫蘇糖醇）處理樣本后，重新進(jìn)行檢測(cè)，IgM檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性；或者選用其他合理的方法進(jìn)行驗(yàn)證。

表2 建議用于干擾研究的物質(zhì)（推薦）

4. 精密度

具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）文件或國內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等，針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。

4.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除申報(bào)試劑本身外，還應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、檢測(cè)儀器等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

4.2 設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，如有條件，建議申請(qǐng)人選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

4.3 用于精密度評(píng)價(jià)的質(zhì)控品應(yīng)至少包含陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性三個(gè)水平。

5. 陽性/陰性參考品

如申報(bào)產(chǎn)品有相應(yīng)的國家參考品，則企業(yè)內(nèi)部陽性/陰性參考品應(yīng)參考國家參考品的項(xiàng)目設(shè)置。在不低于國家參考品要求的前提下，申請(qǐng)人可以結(jié)合實(shí)際情況設(shè)置合理的內(nèi)部陽性/陰性參考品。對(duì)于沒有國家參考品的產(chǎn)品，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際情況并結(jié)合國家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的相關(guān)要求（如有）自行設(shè)定企業(yè)內(nèi)部參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗體滴度要求，陰性參考品則主要涉及對(duì)分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。

申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)部陽性/陰性參考品的來源、抗體滴度等信息進(jìn)行精確的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，并提交詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

6. 鉤狀（HOOK）效應(yīng)

須采用高滴度的ToRCH特異性抗體的血清進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測(cè)，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5份，對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。建議在產(chǎn)品說明書上明示對(duì)鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。

對(duì)于半定量和定量檢測(cè)試劑，除上述6條外，還應(yīng)包含對(duì)稀釋線性（準(zhǔn)確性）和線性范圍的評(píng)估資料。

7. 稀釋線性（準(zhǔn)確性）

可采用如下方法進(jìn)行：對(duì)至少兩個(gè)水平的血清樣本進(jìn)行梯度稀釋，計(jì)算稀釋血清的活性并與稀釋系數(shù)相乘以計(jì)算未稀釋血清的活性，比較計(jì)算所得抗體活性與已知值之間的差異。申請(qǐng)人也可以選擇其他合理的方式，如回收試驗(yàn)等，對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)的準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)價(jià)。

8. 線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測(cè)定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測(cè)定范圍內(nèi)選擇7～11個(gè)濃度水平。例如，將預(yù)期測(cè)定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。

（八）參考值（范圍）確定資料

重點(diǎn)提交對(duì)申報(bào)試劑陰性/灰區(qū)/陽性等結(jié)果判斷的臨界（cut-off,CO）值確定的實(shí)驗(yàn)研究資料，應(yīng)包括具體的試驗(yàn)方案、人群選擇、評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和研究數(shù)據(jù)等研究資料。建議采用受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve, ROC）的分析方式來選擇確定合理的CO值，如實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析存在灰區(qū)（equivocal zone），則應(yīng)明確灰區(qū)建立的基礎(chǔ)。CO值建立的樣本來源選擇應(yīng)考慮到地域性、季節(jié)、不同的感染階段和生理狀態(tài)等因素的影響，并明確CO值在不同的樣本類型是否有差異。對(duì)CO值建立后所產(chǎn)生的臨床靈敏度和特異性進(jìn)行充分判斷，使產(chǎn)生假陰性或假陽性結(jié)果的可能性均降至最低。

對(duì)于采用酶聯(lián)免疫分析技術(shù)的檢測(cè)試劑，在各檢測(cè)條件固定的情況下，申請(qǐng)人也可以采用確定臨界值的常用方法，通過：①確定臨界值中的n數(shù)值（臨界值=陰性樣品平均A值+n×標(biāo)準(zhǔn)偏差）；②確定陰性樣品A值的標(biāo)準(zhǔn)差；③臨床樣本臨界值的驗(yàn)證；這三個(gè)步驟檢測(cè)并計(jì)算確定試劑盒的臨界值。

（九）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、高溫加速破壞穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及開瓶穩(wěn)定性（如涉及）等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料?？紤]到樣本中抗體對(duì)儲(chǔ)存環(huán)境普遍敏感，申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)各種儲(chǔ)存條件下的樣本穩(wěn)定性進(jìn)行合理的驗(yàn)證，以確認(rèn)不同類型樣本的短期、長期保存條件及效期。需要冷凍保存的樣本應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。某些用于防腐、冷凍用途或起穩(wěn)定保護(hù)作用的添加劑（如疊氮化物）可能會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響，如涉及，請(qǐng)對(duì)該添加劑的影響進(jìn)行合理驗(yàn)證。

另外，如果要用于加熱樣本（如熱滅活）的檢測(cè)，則應(yīng)對(duì)加熱前后的ToRCH特異性抗體陽性及陰性樣本進(jìn)行加熱因素的干擾驗(yàn)證。方法為對(duì)臨界值附近的至少10份弱陽性加熱和未加熱樣本進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)，比較檢測(cè)結(jié)果的差異；對(duì)至少10份陰性加熱和未加熱的樣本進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)，比較檢測(cè)結(jié)果的差異。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（十）臨床試驗(yàn)資料

1. 研究方法

對(duì)于“已有同品種批準(zhǔn)上市”產(chǎn)品的臨床研究，選擇已批準(zhǔn)上市產(chǎn)品、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效?？紤]到試劑盒的預(yù)期用途，臨床試驗(yàn)中陽性和陰性樣本均應(yīng)包括一定量的非凍存樣本。

對(duì)于ToRCH特異性IgM檢測(cè)試劑，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)急性期患者樣本進(jìn)行考核試劑與參考方法的一致性研究，以評(píng)價(jià)考核試劑的臨床靈敏度和特異性。用于評(píng)價(jià)的樣本可選擇處于感染急性期患者的新鮮采集樣本（TOXOIgM項(xiàng)目不少于10例，其他三項(xiàng)不少于30例）；或者選擇商業(yè)血清轉(zhuǎn)化盤（不少于5套）；或者選擇新鮮采集樣本聯(lián)合商業(yè)血清轉(zhuǎn)化盤。參考方法可以采用用于感染急性期判斷的方法，例如：ToRCH特異性IgG抗體的血清學(xué)轉(zhuǎn)換（動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)2份或以上的血清IgG，恢復(fù)期與急性期比較IgG呈4倍以上升高）、核酸檢測(cè)或直接抗原檢測(cè)等方法，對(duì)于ToRCH感染急性期的判斷應(yīng)密切結(jié)合患者的臨床診斷綜合進(jìn)行。建議TOXO IgM檢測(cè)試劑進(jìn)行與Sabin-Feldman染色試驗(yàn)（DT）方法結(jié)合間接免疫熒光法和/或其他可有效診斷和公認(rèn)的方法的一致性研究。

目前，部分IgG抗體親合力檢測(cè)項(xiàng)目無已上市的同類產(chǎn)品，對(duì)于該類申報(bào)試劑的臨床研究，建議以ToRCH特異性抗體血清學(xué)結(jié)果（包括血清學(xué)轉(zhuǎn)換）結(jié)合臨床診斷作為對(duì)比方法，進(jìn)行臨床研究。

2. 臨床研究單位的選擇

申請(qǐng)人在國內(nèi)不同區(qū)域選擇臨床單位，盡量使各單位的臨床樣本有一定的區(qū)域代表性；臨床研究單位應(yīng)具有ToRCH感染疾患診療或分子生物學(xué)方法（若臨床試驗(yàn)中涉及此方法）檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和對(duì)比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3. 臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各研究單位選用的對(duì)比試劑應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

4. 病例選擇及樣本類型

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇預(yù)期適用人群，包括高流行率地區(qū)育齡婦女及孕婦、具有ToRCH感染癥狀/體征、相似癥狀或與傳染源有密切接觸史等的人群，作為研究對(duì)象。對(duì)于ToRCH特異性IgG半定量和/或定量檢測(cè)試劑，樣本待測(cè)物濃度應(yīng)覆蓋檢測(cè)范圍。企業(yè)在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。臨床研究中ToRCH特異性IgM抗體陽性和特異性IgG抗體陰性樣本，不少于120例，IgG抗體低親合力樣本例數(shù)不少于90例，且每家醫(yī)院的陽性和陰性樣本例數(shù)應(yīng)盡量考慮樣本的分布。對(duì)于陰性病例的選擇，也應(yīng)考慮對(duì)交叉反應(yīng)和干擾因素的評(píng)價(jià)，企業(yè)應(yīng)選擇除靶病原體之外的其他易混淆的病原體感染患者、自身免疫性疾病患者、溶血、脂血、黃疸樣本進(jìn)行檢測(cè)，以從臨床角度考察其分析特異性。

CMV等ToRCH病原體的感染率較高，對(duì)該類ToRCH特異性IgG陽性的樣本，若隨機(jī)收樣進(jìn)行IgG抗體親合力檢測(cè)，很難獲得近期感染的低親合力樣本。因此，建議先對(duì)入組樣本進(jìn)行有針對(duì)性地篩選，如：選擇同一廠家的配套試劑盒檢測(cè)ToRCH特異性IgG抗體，選擇高濃度的IgM抗體、低濃度的IgG抗體作為親合力檢測(cè)的入組樣本；或者，選擇同一廠家的配套試劑盒檢測(cè)ToRCH特異性IgM和ToRCH特異性IgG抗體，二者同時(shí)為陽性的樣本可作為親合力檢測(cè)的入組樣本。建議在臨床報(bào)告的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究結(jié)果中對(duì)入組樣本的篩選過程進(jìn)行詳細(xì)描述。

5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、ROC分析和陰性/陽性符合率等。對(duì)于本類定性檢測(cè)試劑對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，常選擇配對(duì)2×2表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以檢驗(yàn)兩種檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并驗(yàn)證其一致性是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。以kappa檢驗(yàn)為例，除應(yīng)計(jì)算kappa值外，還應(yīng)對(duì)總體kappa值與“0”之間的差別是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)。對(duì)于半定量檢測(cè)試劑對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，應(yīng)在上述統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上，根據(jù)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)分布特點(diǎn)，采用Person相關(guān)系數(shù)等統(tǒng)計(jì)方法對(duì)考核試劑檢測(cè)值與對(duì)比試劑檢測(cè)值線性相關(guān)關(guān)系進(jìn)行分析。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與對(duì)比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于定量檢測(cè)試劑對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的一致性，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)特點(diǎn)，選擇適用的回歸分析方法，如Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析等。

6. 結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)兩種試劑檢測(cè)結(jié)果明顯不一致的樣本，應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。如果考核試劑與對(duì)比試劑的檢測(cè)結(jié)果顯示不一致樣本均是位于二者的臨界值附近并且例數(shù)很少（如低于總例數(shù)的1%），則對(duì)不一致原因作簡要分析即可，不須進(jìn)行第三方復(fù)核。注意，如果有必要選擇第三方試劑復(fù)核，建議先采用第三方試劑對(duì)一定數(shù)量的考核試劑和對(duì)比試劑檢測(cè)結(jié)果一致的樣本（包括陽性和陰性結(jié)果）進(jìn)行檢測(cè)，以對(duì)第三方試劑選擇的合理性進(jìn)行評(píng)估。

7. 臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

7.1 臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

7.1.1 臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

7.1.2 病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)。

7.1.3 樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

7.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

7.2 具體的臨床試驗(yàn)情況

7.2.1 考核試劑和對(duì)比試劑的名稱、批號(hào)、有效期等信息。

7.2.2 對(duì)各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

7.2.3 質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、質(zhì)控品檢測(cè)情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估。

7.2.4 具體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

7.3 臨床研究結(jié)果及分析

7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)灰區(qū)樣本、異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改。

7.3.2 結(jié)果的一致性分析

計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總體符合率及其95%（或99%）的置信區(qū)間。采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法，對(duì)定性檢測(cè)試劑進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)，對(duì)半定量檢測(cè)試劑進(jìn)行線性相關(guān)性分析，對(duì)定量檢測(cè)試劑進(jìn)行一致性分析。另外考慮到對(duì)不同樣本類型以及不同人群的檢測(cè)結(jié)果可能存在一定差異，故建議對(duì)不同樣本類型及不同人群分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以對(duì)考核試劑的臨床性能進(jìn)行綜合分析。

7.4 討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究的特別說明（如有），最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

三、參考文獻(xiàn)

1.《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》，（國食藥監(jiān)械〔2007〕229號(hào)），2007年4月19日。

2.《體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》，（國食藥監(jiān)械〔2007〕240號(hào)），2007年4月28日。

3. 《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》，（國食藥監(jiān)械〔2007〕240號(hào)），2007年4月28日。

4. Review Criteria for In Vitro Diagnostic Devices for Detection of IgM Antibodies to Viral Agents, CDRH FDA, USA February 27, 1997。

5. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Specifications for immunological testing for infectious diseases; Approved guideline, LA18-A2, 2001。

6. 王玉蘭，吳建民，《臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)》，第4版，人民衛(wèi)生出版社，2007年7月。

7. 李衛(wèi)，《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法》，第一版，人民軍醫(yī)出版社，2012年9月。

8. 陳敬賢，《診斷病原體學(xué)》，第一版，人民衛(wèi)生出版社，2008年4月。

9. 馮仁豐，《臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)》，第二版，上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007年4月。

10. 《中國生物制品規(guī)程》（2000年版），化學(xué)工業(yè)出版社。

11. Class II Special Controls Guidance Document: Herpes Simplex Virus Types 1 and 2 Serological Assays , CDRH FDA, August 9,2011。

12. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Clinical use and interpretation of serologic tests for toxoplasma gondii; Approved guideline,M36-A,2004。

13. 焦奎，張書圣《酶聯(lián)免疫分析技術(shù)及應(yīng)用》，第一版，化學(xué)工業(yè)出版社，2004年8月。

弓形蟲、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒抗體
及G型免疫球蛋白抗體親合力檢測(cè)試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則
編制說明

一、編寫目的及依據(jù)

弓形蟲( Toxoplasma, TOXO ) 、風(fēng)疹病毒( Rubella virus , RV) 、巨細(xì)胞病毒(Cytomegalovirus , CMV) 及單純皰疹病毒(herpes simplex virus, HSV) 四種病原體，以縮寫形式ToRCH命名。上述四種病原體已引起圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)家和優(yōu)生優(yōu)育學(xué)家的關(guān)注，并廣泛應(yīng)用于圍產(chǎn)期檢測(cè)。但如何科學(xué)有效的應(yīng)用還應(yīng)基于大量的研究及相關(guān)學(xué)科的診療指南。為了規(guī)范ToRCH抗體檢測(cè)試劑的說明書編寫，充分評(píng)價(jià)ToRCH抗體檢測(cè)試劑的性能，更加全面地進(jìn)行臨床試驗(yàn)研究，特此編寫本指導(dǎo)原則。

除《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）》（以下簡稱《辦法》）、《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》、《體外診斷試劑臨床研究指導(dǎo)原則》等有關(guān)體外診斷試劑的法規(guī)文件對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的總體原則性指導(dǎo)外，由于申報(bào)產(chǎn)品較多，且檢測(cè)方法、用途各異，本指導(dǎo)原則對(duì)于不同檢測(cè)原理、不同預(yù)期用途的ToRCH檢測(cè)試劑應(yīng)如何進(jìn)行說明書編寫，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)制定，分析性能評(píng)估和臨床試驗(yàn)進(jìn)行了詳細(xì)的規(guī)范，對(duì)于一些要點(diǎn)也進(jìn)行了詳細(xì)闡述，對(duì)于申報(bào)資料中的一些常見問題進(jìn)行了明確。

本指導(dǎo)原則不包括行政審批要求，不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行。本指導(dǎo)原則是申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員的指導(dǎo)文件，如果有能夠滿足適合的法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

二、相關(guān)問題的說明

（一）在說明書中明確“不得用于無癥狀人群的產(chǎn)前篩查”。

本指導(dǎo)原則規(guī)范了產(chǎn)品預(yù)期用途為ToRCH抗體檢測(cè)，可用于ToRCH感染輔助診斷及免疫狀態(tài)的評(píng)估。IgG抗體親合力檢測(cè)，用于輔助判斷感染時(shí)間，排除近期原發(fā)性感染。并明確本類試劑尚不用作產(chǎn)前篩查。

根據(jù)市場需求及當(dāng)今的臨床應(yīng)用現(xiàn)狀，多數(shù)企業(yè)在討論過程中認(rèn)為不應(yīng)在說明書中注明“ToRCH IgM不得用于無癥狀人群的產(chǎn)前篩查”。但是基于臨床及檢驗(yàn)科專家及國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心的認(rèn)知，目前ToRCH IgM檢測(cè)假陽性較多，檢測(cè)陽性具有指示孕婦近期感染的作用，且后續(xù)確認(rèn)手段不完備，無法準(zhǔn)確告知孕婦是否為近期感染，易對(duì)受檢者造成嚴(yán)重的不良影響。經(jīng)反復(fù)討論，保留在說明書中的相關(guān)描述。

（二）建議ToRCH IgM檢測(cè)試劑的預(yù)期用途定義為定性檢測(cè)。

關(guān)于ToRCH IgM檢測(cè)試劑僅可用于定性檢測(cè)和ToRCH IgM檢測(cè)試劑可用于定量檢測(cè)的討論貫穿整個(gè)指導(dǎo)原則的編寫過程。經(jīng)討論及溝通，認(rèn)為雖ToRCH IgM檢測(cè)在指示急性感染中具有一定的臨床意義，但由于檢測(cè)方法的局限性，目前無法作為準(zhǔn)確的定量試劑，且臨床中亦可以通過ToRCH IgG抗體的4倍升高指示急性感染。因此保留對(duì)ToRCH IgM檢測(cè)試劑的預(yù)期用途定義為定性檢測(cè)的建議。

（三）臨床試驗(yàn)中的樣本例數(shù)。

指導(dǎo)原則編寫之初建議臨床研究中ToRCH特異性IgM抗體陽性和特異性IgG抗體陰性樣本不少于120例，ToRCH IgG抗體低親合力樣本例數(shù)不少于120例。企業(yè)認(rèn)為此處建議的樣本例數(shù)較高難以達(dá)到，尤其是ToRCH IgG抗體低親合力樣本，理論上更加難于獲得。鑒于ToRCH IgG抗體低親合力樣本的獲得一般需經(jīng)過在ToRCH IgM樣本陽性中篩選獲得，較ToRCH IgM樣本陽性更加難以獲取，綜合考慮臨床評(píng)價(jià)及統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，將對(duì)ToRCH IgG抗體低親合力樣本例數(shù)的建議調(diào)整為不少于90例。

三、編寫單位

國家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。